ME1和ME2在肾癌中的表达及其功能研究

发布时间：2017-08-11 01:11

  本文关键词：ME1和ME2在肾癌中的表达及其功能研究

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【摘要】：肿瘤是常见的人类疾病,肾癌是其中之一,组织较多的脂质堆积,其代谢的异常特点能够引起人们对其代谢机制进行探索。苹果酸酶在细胞内催化苹果酸转化成丙酮酸,产生NADPH或者NADH。据报道,ME1和ME2在癌症中存在表达差异,与肿瘤相关基因的调控存在联系,因此其生物学功能作用愈发凸显,主要表现在肝癌、乳腺癌和鼻炎癌等肿瘤中。目前为止,肾癌中ME1和ME2的细胞生物学特点基本没人报道。本论文主要针对ME1和ME2在肾癌中的作用,做出以下研究内容。利用肾癌组织和肾癌细胞系,研究ME1和ME2在肾癌中的表达差异。主要利用q RT-PCR实验检测肾癌中ME1和ME2的RNA水平的变化;利用western blot实验检测肾癌中ME1和ME2的蛋白变化;利用免疫组化实验检测肾癌切片中ME1和ME2的分布特点及表达特点;另外,从肾正常细胞系和肾癌细胞系中对照比较ME1和ME2的变化。实验结果发现,与正常组织相比,ME1和ME2在肾癌中表达是降低的,而ME1的降低程度更加明显。细胞系是脱离体内组织的生物环境,其相关基因的表达差异与组织不太一样。为了探索ME1在肾癌中的功能,主要利用与组织特点相符表达的肾癌细胞系RC2,通过病毒包装,感染肾癌细胞系,促使肾癌细胞系RC2中ME1过表达,检测细胞的增殖、凋亡、周期和ROS的水平变化。实验结果发现,过表达ME1后,RC2细胞的增殖能力明显下降,通过流式细胞仪检测,过表达ME1对肾癌细胞系RC2在凋亡方面没有影响,同时,检测细胞周期发现,过表达ME1能够引起细胞的周期阻滞,停滞于G1期。据报道,ROS能够诱导细胞增殖也促进细胞凋亡,过表达ME1的RC1细胞,其ROS水平明显高于对照组细胞,具体ME1诱导ROS的产生对肿瘤的发生发展有何作用有待于进一步研究。肾癌中ME1能够抑制细胞周期的循环与肾癌组织肿瘤的特点相符,可进一步探究ME1在调控细胞周期方面的影响。ROS是肿瘤检测的功能指标,研究ME1诱导ROS产生的具体机制是下一步工作的重点。
【关键词】：肾癌 细胞周期 苹果酸酶 ROS
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 绪论9-16
• 1.1 肿瘤中代谢的研究进展9-10
• 1.2 苹果酸酶(ME) 在癌症中的研究进展10-11
• 1.3 肾癌的研究基础及其分子机制11-14
• 1.4 技术路线图14
• 1.5 课题主要研究内容14-16
• 第2章 材料与方法16-32
• 2.1 实验材料与试剂16-19
• 2.1.1 实验材料16
• 2.1.2 实验试剂16-19
• 2.2 实验方法和步骤19-32
• 2.2.1 细胞复苏与传代培养19
• 2.2.2 RNA提取步骤19-21
• 2.2.3 q RT-PCR实验21
• 2.2.4 肾癌蛋白及细胞蛋白提取21-22
• 2.2.5 Western blot实验22-23
• 2.2.6 免疫组化实验(IHC)23-24
• 2.2.7 慢病毒载体PLKO.1-sh RNA的构建24-25
• 2.2.8 逆转录病毒载体p HR-ME1 和p HR-ME2 的构建25-26
• 2.2.9 293T细胞中病毒包装及感染肾癌细胞系26-28
• 2.2.10 酶活测定28-29
• 2.2.11 MTT法检测细胞增殖29-30
• 2.2.12 流式细胞仪检测细胞周期30
• 2.2.13 流式细胞仪检测细胞凋亡30-31
• 2.2.14 流式细胞仪检测细胞ROS31-32
• 第3章 ME1 和ME2 在肾癌中的表达差异32-42
• 3.1 肾癌组织中ME1 和ME2 的RNA水平的改变32-33
• 3.2 ME1 和ME2 在肾癌组织中蛋白水平的差异33-35
• 3.3 免疫组化方法检测肾癌组织样本之间的差异35-38
• 3.4 肾癌细胞系中的表达差异38-41
• 3.5 本章小结41-42
• 第4章 ME1 在肾癌细胞内生物学功能研究42-49
• 4.1 ME1 在肾癌细胞系增殖方面的影响42-44
• 4.2 ME1 在细胞凋亡方面的影响44-46
• 4.3 ME1 在细胞周期阻滞方面的影响46-47
• 4.4 ME1 对肾癌细胞中ROS的影响47
• 4.5 本章小结47-49
• 结论49
• 展望49-50
• 实验数据50-54
• 参考文献54-60
• 致谢60

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1 蒋诗健;ME1和ME2在肾癌中的表达及其功能研究[D];哈尔滨工业大学;2015年

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本文编号：653526