曲古菌素A调控STAT5A干预胃癌细胞增殖的研究

发布时间：2017-08-13 00:21

  本文关键词：曲古菌素A调控STAT5A干预胃癌细胞增殖的研究

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【摘要】：胃癌(gastric cancer)是一种常见肿瘤，全球每年约有70万人死于胃癌。目前对胃癌的治疗以手术切除为主，同时配合放疗和化疗药物治疗，但由于放疗和化疗对机体正常细胞有副作用，导致临床疗效降低，病人预后不良。因此，寻求胃癌新的治疗靶标及药物成为目前亟待解决的问题。 信号转导与转录激活子5A(signal transducer and activator of Transcription5A,STAT5A)是STAT家族中的一员。有研究表明，正常组织STAT5A的表达量较少，但肿瘤组织中STAT5A的表达量则会明显增多。此外，STAT5A与肿瘤细胞的增殖、分化、存活与凋亡存在着密切的关系。据文献报道，其下游有许多对应靶点，其中端粒酶是其重要靶点之一，当敲除STAT5A后，端粒酶的表达量减少，活性降低。端粒酶具有使细胞增殖分裂的作用，其活性的高低关系着肿瘤细胞增殖能力的强弱。因此，推测胃癌细胞的高度增殖可能与STAT5A表达增加，进而调节端粒酶活性影响细胞增殖能力相关。 曲古菌素A（TrichostatinA, TSA）是一种广谱的组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylases, HDACs）抑制剂。近年来发现，TSA对多种肿瘤具有促进凋亡及抑制增殖等作用。究其原因是由于TSA可以通过调节组蛋白乙酰化程度，从而调控肿瘤中相关基因转录及其蛋白的表达，，进而干预肿瘤的生物学功能。目前，已有文献报道，TSA对胃癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期等具有一定的调节作用，但具体机制尚未明确。 实验目的： 本实验旨在研究TSA是否通过调控STAT5A表达，对胃癌细胞增殖能力及其细胞周期产生影响；并且观察这种作用是否由调节端粒酶活性产生；探讨TSA的干预作用是否通过调控Ⅰ类HDACs活性而实现。 实验方法： 实验以胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823及胃上皮细胞系GES-1为观察对象，通过western blot技术检测其STAT5A表达；通过CCK-8法确定TSA给予的时间和浓度；通过western blot检测给药前后SGC-7901和BGC-823细胞系STAT5A表达的变化情况；随后通过CCK-8法和流式细胞术观察给药前后细胞增殖与细胞周期的变化情况；应用端粒酶活性检测试剂盒测定给药前后端粒酶活性变化情况；最后应用HDACs活性试剂盒检测给予TSA前后HDACs活性的变化情况。 实验结果： 实验发现，胃癌细胞系SGC-7901及BGC-823中STAT5A的表达量高于胃上皮细胞系GES-1中STAT5A的表达量，具有显著的统计学差异（P＜0.05）；给予300nM TSA后SGC-7901和BGC-823中STAT5A表达量均降低，且呈时间依赖性；其中胃癌细胞系BGC-823细胞在给予300nM TSA后STAT5A表达量降低尤为显著；给予300nM TSA后，检测SGC-7901和BGC-823细胞的增殖情况，结果显示，SGC-7901和BGC-823细胞的增殖明显受到抑制；给予300nM TSA孵育24h后，检测结果显示，SGC-7901和BGC-823细胞周期阻滞在G1期；此外，两种细胞给药后端粒酶活性均减弱，其中BGC-823细胞系给予300nM TSA后与未给予TSA的对照组相比，端粒酶活性降低具有显著性差异（P＜0.01）；SGC-7901和BGC-823细胞给药后HDAC1、2、3、8的活性均有不同程度的下降，并且在BGC-823细胞中上述四种HDAC活性下降更为明显。 实验结论： 1.胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中STAT5A呈现高表达；TSA可以抑制胃癌细胞增殖，使细胞周期阻滞在G1期； 2．TSA可时间依赖性地下调胃癌细胞中STAT5A的表达，并且降低端粒酶的活性； 3．TSA降低胃癌细胞系中STAT5A的表达可能通过影响Ⅰ类HDACs活性实现的。
【关键词】：胃癌 乙酰化 STAT5A 曲古菌素A
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩写词表11-12
• 前言12-13
• 第1章 文献综述13-22
• 1.1 胃癌的研究进展13-14
• 1.1.1 胃癌简介13
• 1.1.2 胃癌发生机制的研究现状13-14
• 1.1.3 胃癌治疗靶标研究进展14
• 1.2 STAT5A 与肿瘤的关系14-19
• 1.2.1 STAT5A 简介14-16
• 1.2.2 STAT5A 的生物学效应16-17
• 1.2.3 STAT5A 与端粒酶的关系17-19
• 1.3 组蛋白修饰与肿瘤治疗19-22
• 1.3.1 组蛋白修饰19
• 1.3.2 乙酰化修饰对肿瘤的作用19-20
• 1.3.3 组蛋白去乙酰化酶抑制剂20-22
• 第2章 实验材料与方法22-34
• 2.1 实验用细胞株22
• 2.2 主要仪器设备22
• 2.3 主要试剂22-24
• 2.4 主要试剂的配制24-27
• 2.5 SGC-7901、BGC-823 及 GES-1 细胞的培养27-28
• 2.6 CCK-8 试剂盒确定 TSA 的给药浓度及时间28
• 2.7 流式细胞术检测细胞周期28-29
• 2.8 SGC-7901、BGC-823 细胞中的 HDACs 活性检测29-31
• 2.9 Western Blot 检测 SGC-7901、BGC-823、GES-1 细胞 STAT5A 的表达情况31-32
• 2.10 端粒酶活性检测32-33
• 2.11 统计学分析33-34
• 第3章 实验结果34-46
• 3.1 胃上皮细胞系及胃癌细胞系 STAT5A 的差异性表达34-35
• 3.2 TSA 对胃癌细胞系的作用35-43
• 3.2.1 TSA 给药剂量及给药时间的确定35-37
• 3.2.2 TSA 对胃癌细胞系 STAT5A 表达量的影响37-39
• 3.2.3 STAT5A 表达下调对胃癌细胞增殖的影响39-40
• 3.2.4 STAT5A 表达下调对胃癌细胞周期的影响40-41
• 3.2.5 STAT5A 下调后对端粒酶活性的影响41-43
• 3.3 TSA 对胃癌细胞中Ⅰ类 HDACs 活性的影响43-46
• 第4章 讨论46-49
• 第5章 结论49-50
• 参考文献50-58
• 致谢58

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