Pokemon在MCF-7细胞中对Smad4表达的影响及其机制的初步探究

发布时间：2017-08-13 04:05

  本文关键词：Pokemon在MCF-7细胞中对Smad4表达的影响及其机制的初步探究

  更多相关文章： Pokemon Smad4 MCF-7 MDA-MB-231 BCSCs

【摘要】：目的:观察Pokemon在人乳腺癌MCF-7细胞中对Smad4表达的影响,并初步探究其相关分子机制。方法:实验分为二部分。第一部分:1)以体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,通过转染空载体质粒及Pokemon表达质粒分别作为对照组和实验组,用Q-PCR、Western Blot及免疫荧光分别从核酸水平、蛋白水平及形态学三个方面检测Pokemon对Smad4表达的影响;2)以体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,研究Pokemon对Smad4启动子活性的影响。通过瞬时转染空载体质粒作为对照组,瞬时转染Pokemon表达质粒作为实验组,然后应用双荧光素酶报告基因活性实验分析对照组和实验组的Smad4启动子的活性。第二部分:1)以体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,通过瞬时转染空载体质粒及Pokemon表达质粒分别作为对照组和实验组,以及培养稳定高表达Pokemon的MCF-7细胞,然后应用流式细胞术检测对照组和实验组的乳腺癌干样细胞数目的比率;2)以体外培养的MDA-MB-231细胞为研究对象,通过瞬时转染空载体质粒和Pokemon表达质粒分别作为对照组和实验组,应用流式细胞术检测对照组和实验组的乳腺癌干样细胞数目的比率。结果:第一部分:1.Pokemon在人乳腺癌MCF-7细胞抑制Smad4的表达。通过在MCF-7细胞中瞬时转染空载体质粒及Pokemon表达质粒:1)Q-PCR实验结果显示:Pokemon抑制Smad4 m RNA的转录(p0.01);2)免疫荧光实验结果显示:Pokemon抑制Smad4蛋白的表达(p0.05);3)Western Blot实验结果显示:Pokemon抑制Smad4蛋白的表达(p0.05)。4)在稳定高表达Pokemon的MCF-7细胞中,Western Blot实验结果显示:Pokemon抑制Smad4蛋白的表达(p0.05)。2.Pokemon在人乳腺癌MCF-7细胞中抑制Smad4启动子的活性。1)验证由本实验构建的3个p GL4.10-Smad4启动子片段在MCF-7细胞中具有转录活性。双荧光素酶报告基因活性实验结果显示:与转染p GL4.10相比,p GL4.10-Smad4各组的荧光比值明显增高(p GL4.10-Smad4pp1 p0.001,p GL4.10-Smad4pp2 p0.05,p GL4.10-Smad4pp3 p0.05);2)研究Pokemon在MCF-7细胞中对p GL4.10-Smad4启动子片段活性的影响。双荧光素酶活性实验结果显示:在3个转染了不同长度的p GL4.10-Smad4启动子片段组中,与对照组相比,Pokemon高表达组的Smad4启动子活性均明显下调(p GL4.10-Smad4pp1 p0.05、p GL4.10-Smad4pp2 p0.001、p GL4.10-Smad4 p0.05)。说明Pokemon在MCF-7细胞中抑制Smad4启动子的活性。第二部分:1.Pokemon在人乳腺癌MCF-7细胞中下调BCSCs的比率:流式细胞术实验结果显示:Pokemon在MCF-7细胞中下调瞬转(p0.05)及稳转细胞株(p0.05)中的CD24-/CD44~+的细胞比率。2.Pokemon在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中下调BCSCs的比率:流式细胞术实验结果显示:Pokemon在MDA-MB-231细胞中下调CD24-/CD44~+(p0.05)和CD49f~+/Ep CAM~+(p0.05)的细胞比率。结论:1)Pokemon在人乳腺癌MCF-7细胞中可抑制Smad4的表达,其机制可能与Pokemon通过抑制Smad4启动子活性有关。2)Pokemon在人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中下调BCSCs的比率。
【关键词】：Pokemon Smad4 MCF-7 MDA-MB-231 BCSCs
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要缩略词及英文索引11-13
• 前言13-15
• 第一部分 Pokemon在人乳腺癌MCF-7 细胞中对Smad4表达的影响及其作用机制15-31
• 1 实验材料15-18
• 2 实验方法18-26
• 3 实验结果26-31
• 第二部分 Pokemon在人乳腺癌细胞中对BCSCs的影响31-37
• 1.材料与方法31
• 2 实验方法31-32
• 3 实验结果32-37
• 讨论37-41
• 结论41-43
• 参考文献43-47
• 综述47-61
• 参考文献55-61
• 致谢61

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