肝素酶参与肝癌微血管捕获的证据研究

发布时间：2017-08-14 11:05

  本文关键词：肝素酶参与肝癌微血管捕获的证据研究

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【摘要】：目的:寻找肝素酶(heparanase,HPSE)影响肝癌细胞与血管内皮细胞粘附的分子学证据,并获得HPSE参与肝癌微血管捕获的细胞学证据。方法:1)设计HPSE基因干扰序列并构建质粒,以脂质体法瞬时转染细胞后通过Real-time qPCR和Western-Blot筛选出最优干扰序列;构建HPSE基因过表达慢病毒,感染细胞后运用Real-time qPCR和Western-Blot检验感染效果。2)以上述筛选的最优干扰序列转染HepG-2细胞抑制HPSE基因表达,同时设置非转染组、阴性对照组和空转组,96孔板中观察各组细胞与内皮细胞HUVEC-C粘附情况,以0.25%Rose Bengal染色,脱色后测量各孔OD值并分析比较。3)以HPSE过表达慢病毒载体感染MHCC97-H细胞,同时设置非感染组和阴性对照组,96孔板中观察各组细胞与内皮细胞HUVEC-C粘附情况,并观察各组细胞在Transwell小室中跨内皮细胞迁移情况,以0.25%Rose Bengal染色,脱色后测量各孔OD值并分析比较。结果:1)成功筛选出HPSE基因最优干扰序列siHPSE-3158,并验证了慢病毒载体可使MHCC97-H细胞中HPSE基因过表达;2)排除内皮细胞的影响后,非转染组HepG-2细胞与内皮细胞粘附率(0.351±0.030)高于HPSE基因干扰组(0.239±0.019,P0.01);阴性对照组(0.291±0.027)和空转组(0.297±0.032)粘附率均低于非转染组(P0.05),但高于HPSE基因干扰组(P0.05);阴性对照组和空转组粘附率无明显差异(P0.05);3)排除内皮细胞的影响后,HPSE过表达组MHCC97-H细胞与内皮细胞粘附率(0.512±0.049)明显高于其余两组(P0.01),阴性对照组(0.370±0.027)与未处理组的MHCC97-H细胞组(0.377±0.050)与内皮细胞粘附率无统计学差异(P0.05);4)排除内皮细胞的影响后,HPSE过表达组MHCC97-H细胞跨内皮细胞迁移数量(0.431±0.043)多于明显其余两组(P0.01),阴性对照组(0.306±0.026)与未处理组(0.295±0.044)的MHCC97-H细胞跨内皮细胞迁移数量无统计学差异(P0.05)。结论:运用基因干扰、过表达及体外实验等手段,证实HPSE在促进肝癌细胞与血管内皮细胞粘附以及跨内皮细胞迁移等方面发挥重要作用,参与介导了肝癌微血管捕获过程。
【关键词】：肝素酶 肝癌 粘附 迁移
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-18
• 材料18-25
• 1. 细胞系18
• 2. 细菌和质粒18
• 3.慢病毒载体18
• 4. 主要试剂18-19
• 5.部分试剂配置19-22
• 6.实验主要仪器22-25
• 研究内容与方法25-41
• 1.研究内容25
• 2.HPSE基因表达的q PCR验证25-29
• 3. HPSE基因RNA干扰瞬时转染Hep G-2 细胞及质粒筛选29-36
• 4. HPSE对Hep G-2 细胞和内皮细胞粘附的影响36-37
• 5. 慢病毒感染MHCC97-H细胞HPSE基因过表达的验证37-38
• 6. HPSE基因过表达对MHCC97-H细胞和内皮细胞粘附的影响38-39
• 7. HPSE对MHCC97-H细胞跨内皮细胞迁移的影响39-41
• 结果41-55
• 1. 细胞HPSE基因表达的q PCR验证41
• 2. HPSE基因RNA干扰瞬时转染Hep G-2 细胞及质粒筛选41-45
• 3. HPSE对Hep G-2 细胞和内皮细胞粘附的影响45-47
• 4. 慢病毒感染MHCC97-H细胞HPSE基因过表达的验证47-49
• 5. HPSE对MHCC97-H细胞和内皮细胞粘附的影响49-52
• 6. HPSE对MHCC97-H细胞跨内皮细胞迁移影响52-55
• 讨论55-61
• 结论61-62
• 参考文献62-69
• 综述69-77
• 参考文献73-77
• 附录77-78
• 作者简介及读研期间主要科研成果78-79
• 致谢79

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本文编号：672305