肝素酶参与肝癌微血管捕获机制探究

发布时间：2017-08-14 16:34

  本文关键词：肝素酶参与肝癌微血管捕获机制探究

  更多相关文章： 肝细胞癌 硫酸乙酰肝素蛋白多糖 粘附 Syndecan-1 Syndecan-3

【摘要】：目的:探究肝素酶(heparanase,HPSE)参与肝癌细胞与血管内皮细胞粘附的相关机制,以确定参与粘附过程的关键硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparin sulfate proglycan HSPG),并获得其细胞定位。方法:1)选取si HPSE-3158基因干扰序列构建质粒,以脂质体法瞬时转染肝癌细胞(Hep G-2),抑制HPSE的表达,同时设置阴性对照组和空白组。在六孔板中将各组细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)行粘附实验,通过Western-Blot法检测各组中Syndecan-1、Syndecan-3表达量的变化。2)选取上述表达量变化较为明显的HSPG亚型,通过免疫细胞化学观察其细胞定位。结果:1)Western-Blot结果:Hep G-2细胞和HUVEC-C粘附后,干扰组、阴性对照组和空白组中Syndecan-1的表达水平用相对灰度值表示分别为1.885?0.113、1.870?0.087、1.837?0.116,可见干扰组、阴性对照组和空白组中Syndecan-1的表达量无明显统计学差异(P0.05)。三组中Syndecan-3的表达水平用相对灰度值表示为1.452?0.093、1.079?0.134、1.019?0.105,可见干扰组中Syndecan-3的表达量明显高于阴性对照组和空白组(P0.05),阴性对照组和空白组中Syndecan-3的表达量无明显统计学差异(P0.05);2)免疫细胞化学结果:血管内皮细胞中Syndecan-3在胞浆和胞膜均有表达。结论:肝素酶对肝癌细胞与血管内皮细胞粘附过程中硫酸肝素蛋白多糖表达有一定的影响,Syndecan-3可能参与肝素酶介导的肝癌细胞与血管内皮细胞粘附过程,并验证了其在血管内皮细胞的胞浆和胞膜中均有表达。
【关键词】：肝细胞癌 硫酸乙酰肝素蛋白多糖 粘附 Syndecan-1 Syndecan-3
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 材料13-20
• 研究内容与方法20-32
• 0 研究内容20
• 1 实验方法20-30
• 1.1 细胞的复苏、换液、传代及冻存20-21
• 1.2 摇菌及质粒的提取21-23
• 1.3 脂质体法瞬时转染HepG-2细胞23-25
• 1.4 HepG-2细胞和内皮细胞的粘附25-26
• 1.5 Western-Blot检查HSPG含量变化26-30
• 2 免疫化学方法观察HSPG细胞定位30-31
• 3 统计学方法31-32
• 结果32-36
• 讨论36-42
• 结论42-43
• 参考文献43-49
• 综述 肝素酶在恶性肿瘤侵袭中的研究49-63
• 参考文献57-63
• 作者简介及读研期间主要科研成果63-64
• 致谢64

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本文编号：673647