口腔癌VEGF诱导致耐受性DC对T细胞免疫功能的影响

发布时间：2017-08-16 12:43

  本文关键词：口腔癌VEGF诱导致耐受性DC对T细胞免疫功能的影响

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【摘要】：[目的]研究口腔癌VEGF诱导致耐受性DC对T细胞免疫功能的影响。[方法]1.体外培养SCC7肿瘤细胞系,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测培养上清中VEGF含量；利用Transwell系统将SCC7细胞系与C57BL/6小鼠骨髓前体细胞共培养,实验分为四组：对照组、VEGF组、共培养组、抗VEGF组。细胞因子GM-CSF+IL-4联合诱导,于培养第5天获得未成熟DC,倒置显微镜观察DC形态变化,流式细胞仪检测DC表面特异性表型分子CDllc、CD80、 CD86、CD40、MHCⅡ的表达,ELISA检测各组DC分泌IL-12的水平,混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)检测各组DC对同种异体T淋巴细胞增殖的影响；2.利用流式细胞术和检测IDO及PD-L1在未成熟DC中表达情况,qPCR测定IDO及PD-L1 mRNA相对表达水平,MLR检测IDO, PD-L1对未成熟DC诱导T细胞增殖能力的影响。实验数据采用SPSS18.0统计软件分析。[结果]1.VEGF在SCC7肿瘤培养上清中的含量随着培养时间的延长而增加,72小时培养组,VEGF含量达630pg/ml;小鼠骨髓前体细胞培养5天后,可得到具有典型形态和免疫表型的未成熟DC,对照组中CDllc、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的表达率分别是60.47±6.13%、54.67±0.91%、45.3±0.92%、65.47±1.14%、30.8±1.57%,与对照组相比,V EGF组,SCC7共培养组及抗VGEF组的细胞数量减少,CDllc、CD80、 CD86、CD40、MHCⅡ的表达率均下降,且具有显著性差异(p0.05),共培养组中各表面分子表达率稍低于抗VEGF组,但无统计学差异(p0.05)；与对照组相比,VEGF组、共培养组及抗VEGF组分泌IL-12水平降低,具有统计学意义(p0.05)；各组未成熟DC能轻度刺激T淋巴细胞增殖,且随着DC与T细胞培养比例的增加,刺激T细胞增殖能力增强；在相同比例下,VEGF组、共培养组及抗VEGF组间较对照组刺激T细胞增殖能力较弱,具有显著性差异(p0.001)；抗VEGF组刺激T细胞增殖能力较肿瘤上清组有增强趋势,且在1：10及1：5组别中差异具有统计学意义(p0.05)。2.小鼠髓源性未成熟DC在VEGF或口腔癌微环境的影响下IDO及PD-L1的蛋白和mRNA的相对表达量增大,且具有统计学意义(p0.05)。共培养组中IDO及PD-L1的表达率分别为88.57±1.36%和69.1±0.95%,拮抗VEGF后,IDO及PD-L1的表达率为79.2±2.55%和61.27±1.7%；高表达IDO, PD-LI的未成熟DC能轻度刺激T淋巴细胞增殖,使用小分子抑制剂1MT拮抗IDO和/或单克隆抗体MIH5拮抗PD-L1后能提高未成熟DC对刺激T淋巴细胞增殖的能力,且联合拮抗组的刺激能力最强,具有统计学意义(p0.05)[结论]口腔癌中VEGF可以抑制小鼠髓样DC分化,维持不成熟状态,抑制DC对同种异体T淋巴细胞增殖的刺激能力；口腔癌中VEGF可促进未成熟DC表面IDO,PD-L1表达增加,使其成为致耐受性DC,并通过抑制T淋巴细胞免疫功能发挥致耐受作用。
【关键词】：口腔鳞状细胞癌 树突状细胞 吲哚胺2 3双加氧酶 程序性坏死因子配体1 血管内皮生长因子
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.85
【目录】：

• 前言5-10
• 参考文献7-10
• 摘要10-12
• abstract12-18
• 第一章 绪论18-27
• 第二章 实验研究27-51
• 第一部分 口腔癌VEGF对小鼠髓源性未成熟树突状细胞发育分化的影响27-40
• 1 引言27
• 2 材料和方法27-31
• 2.1 材料27-28
• 2.2 实验方法28-31
• 2.3 数据统计31
• 3 实验结果31-38
• 3.1 SCC7培养上清中VEGF因子测定31
• 3.2 体外诱导树突状细胞形态变化31-32
• 3.3 未成熟DC表型分析32-35
• 3.4 DC分泌IL-12的能力35-36
• 3.5 DC诱导同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)36-38
• 4 讨论38-39
• 5 结论39-40
• 第二部分 口腔癌VEGF诱导小鼠髓源性未成熟树突状细胞免疫耐受性的研究40-51
• 1 引言40
• 2 材料和方法40-44
• 2.1 材料40-41
• 2.2 实验方法41-43
• 2.3 数据统计43-44
• 3 实验结果44-49
• 3.1 流式细胞术检测口腔癌VEGF诱导imDC表达IDO、PD-L144-45
• 3.2 qPCR检测IDO、PD-L1基因表达情况45-47
• 3.3 未成熟DC高表达IDO,PD-L1对T淋巴细胞增殖的影响47-49
• 4 讨论49-50
• 5 结论50-51
• 参考文献51-55
• 全文总结55-56
• 致谢56-57
• 附录57-58

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本文编号：683373