RhoGDI2沉默对DADS诱导人白血病HL-60细胞分化的影响

发布时间：2017-08-23 14:38

  本文关键词：RhoGDI2沉默对DADS诱导人白血病HL-60细胞分化的影响

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【摘要】：目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜中的一种有效成分,研究发现,DADS可以诱导人白血病HL-60细胞增殖抑制与分化,并通过蛋白质组学分析发现Rho鸟苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)明显下调。RhoGDI2是Rho GDI家族中的重要一员,在多种肿瘤细胞中异常表达,对各种肿瘤的发展、侵袭与转移起着双重调节。本研究主要讨论RhoGDI2沉默对DADS诱导人白血病HL-60细胞分化的影响,以阐明RhoGDI2是诱导HL-60细胞分化的关键靶分子,为开发新一代诱导白血病细胞分化的诱导剂具有重要的意义。方法:通过Western blot和Real-time PCR验证DADS处理后HL-60细胞RhoGDI2的表达。通过脂质体转染法建立RhoGDI2沉默的HL-60细胞系,通过Western blot技术和Real-time PCR技术检测RhoGDI2的沉默效果。通过CCK-8、NBT还原实验、细胞免疫荧光以及Transwell迁移侵袭实验,检测DADS处理后对各个细胞系增殖、分化及迁移侵袭等生物学行为的影响,并以全反式维甲酸(ATRA)为阳性对照。Western blot和Real-time PCR技术检测DADS处理后各个细胞系RhoGDI2,Rac1,Pak1,Limk1的表达情况。结果:1.DADS处理后HL-60细胞RhoGDI2的表达Western blot和q RT-PCR检测显示,DADS处理HL-60细胞0h、12h、24h、36h后,RhoGDI2的蛋白表达及m RNA表达均呈现出时间依赖性的下降(P0.05)。2.构建RhoGDI2沉默HL-60细胞系由Invitrogen公司构建4组不同序列干扰质粒及空载体,分别转入HL-60细胞。Western-blot及q RT-PCR显示,各沉默组较空载体组,RhoGDI2 m RNA与蛋白表达均下降,其中1号序列干扰质粒转染组沉默效果最明显,将其作为后续实验的RhoGDI2沉默细胞系。3.沉默RhoGDI2对DADS诱导HL-60细胞分化的影响NBT还原实验显示,沉默组细胞还原能力较空载体组与未转染组明显增强(P0.05);DADS处理后细胞还原能力明显高于未处理组(P0.05);DADS处理与ATRA处理比较无显著差异(P0.05)。CCK-8、Transwell迁移和侵袭实验显示,沉默组细胞增殖、迁移和侵袭能力较空载体组与未转染组减弱(P0.05);DADS处理后较未处理各组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降(P0.05);DADS处理与ATRA处理无显著差异(P0.05);空载体组与未转染组之间无显著差异(P0.05)。细胞免疫荧光显示,DADS分别处理沉默组、空载体组及未转染组细胞24h后较未处理组,各组中CD11b蛋白表达上升,CD33蛋白表达下降。4.RhoGDI2沉默与DADS对Rac1/LIMK1信号通路的影响Western blot显示,沉默组细胞较空载体组及未转染组RhoGDI2、Rac1、Pak1、LIMK1蛋白表达水平均下调(P0.05);与未处理组相比较,DADS处理24h后各组细胞中RhoGDI2、Rac1、Pak1、LIMK1表达水平均下降(P0.05);DADS处理前后空载体组与未转染组比较均无显著差异(P0.05)。结论:1.沉默RhoGDI2可促进HL-60细胞分化;2.沉默RhoGDI2可增强DADS诱导HL-60细胞分化的作用;3.DADS通过下调RhoGDI2抑制Rac1/LIMK1信号通路,从而诱导HL-60细胞分化。
【关键词】：二烯丙基二硫 人白血病HL-60细胞 RhoGDI2 分化 Rac1/LIMK1通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 第1章 绪论13-15
• 第2章 材料与方法15-25
• 2.1 实验材料15-18
• 2.2 实验方法18-25
• 第3章 结果25-41
• 3.1 DADS 对 HL-60细胞 RhoGDI2表达的影响25-26
• 3.2 构建 RhoGDI2 沉默的 HL-60 细胞系26-30
• 3.3 RhoGDI2 沉默与 DADS 对 HL-60 细胞生物学行为的影响30-36
• 3.4 RhoGDI2 沉默与 DADS 对 Rac1/LIMK1 通路的影响36-41
• 第4章 讨论41-43
• 第5章 结论43-45
• 参考文献45-51
• 综述 RhoGDI2与转移51-61
• 参考文献56-61
• 攻读硕士学位期间的科研成果61-63
• 致谢63

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本文编号：725613