Rad51C在非小细胞肺癌中的临床表达意义及其对细胞放化疗敏感性影响的机制研究

发布时间：2017-08-24 06:02

  本文关键词：Rad51C在非小细胞肺癌中的临床表达意义及其对细胞放化疗敏感性影响的机制研究

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【摘要】：目的:Rad51C蛋白参与DNA损伤修复(DNA damage response,DDR)及维持基因组稳定性,并在在同源重组(homlogous recombination,HR)机制中承担重要角色,参与了肿瘤的发生发展过程。然而,Rad51C在肺癌中的临床及生物学意义仍不是很明确,本研究探求Rad51C表达是否影响了接受放/化疗的非小细胞肺癌病人的治疗疗效及其对人肺癌A549细胞放疗/化疗敏感性的研究。方法:首先,通过免疫组化的方法检测Rad51C蛋白在95例非小细胞肺癌组织及32例癌旁正常肺组织的表达状况,探讨Rad51C基因在肺癌的发生、发展中的作用及其临床预后意义。进一步,构建Rad51C基因稳定干扰的A549细胞株(sh Rad51C组)和乱序目标RNA稳定存在的A549细胞株(Control组),而未经任何处理的正常A549细胞作为阴性对照组(Blank组),蛋白印迹技术检测实验组间Rad51C蛋白的表达并同时应用MTT法、平板克隆形成实验检测基因干扰前后细胞生长增殖是否受影响。其次,给予顺铂化疗药物或电离辐射干预后,通过MTT法、平板克隆形成实验及免疫荧光等细胞实验探索Rad51C对肺癌细胞治疗反应的影响。结果:Rad51C蛋白的阳性表达在非小细胞肺癌组织和癌旁正常肺组织间存在显著性差异(P0.01)。Kaplan Meier分析得出Rad51C蛋白在非小细胞肺癌病人组织中的高表达与病人的放/化疗抵抗及更短的总生存期、无病生存期呈现明显的相关性(P0.05)。下调肺腺癌A549细胞Rad51C的表达后并未影响细胞的增殖,而给予顺铂药物干预后,sh Rad51C组的细胞增殖明显受抑制并呈剂量依赖性,流式细胞术结果显示经顺铂干预后48h的sh Rad51C组细胞凋亡明显增多(P0.01)。进而,通过γH2AX检测技术比较顺铂药物干预前后不同组间DNA双链损伤(double-strand break,DSB)修复水平,sh Rad51C组的γH2AX焦点数明显增多。Rad51C可能通过促进DSB损伤修复、抑制凋亡而降低了化疗疗效。下调肺癌A549细胞Rad51C的表达后并未抑制细胞的克隆形成,予电离辐射刺激后,克隆形成实验结果表明受照射后的sh Rad51C组细胞的克隆形成率明显降低且细胞存活曲线明显下降。进而,通过免疫荧光技术检测γH2AX焦点情况比较IR干预前后不同组间DSB修复差异,得出Rad51C也可通过促进DSB修复而抵抗放疗疗效。结论:本研究可得出Rad51C可作为评估非小细胞肺癌患者预后的预测因子,其高表达可预示病人对放疗/化疗的不敏感。同时,细胞实验研究提示Rad51C可能通过促进DSB损伤修复介导非小细胞肺癌的放/化疗抵抗。Rad51C的表达可能成为NSCLC放疗增敏的有效靶点。
【关键词】：肺癌/非小细胞肺癌 Rad51C 放疗/化疗 DNA损伤修复
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-13
• 前言13-16
• 研究现状、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、免疫组化检测Rad51C在NSCLC组织中的表达意义16-26
• 1.1 对象和方法16-18
• 1.1.1 临床资料及组织标本16-17
• 1.1.2 IHC主要试剂及仪器设备17
• 1.1.3 IHC主要步骤17-18
• 1.1.4 IHC结果判断标准18
• 1.1.5 统计学方法18
• 1.2 结果18-23
• 1.2.1 Rad51C蛋白在NSCLC组织中的表达情况18-19
• 1.2.2 Rad51C蛋白表达水平与NSCLC临床特征的关系19-22
• 1.2.3 Rad51C蛋白表达与NSCLC患者临床预后的关系22-23
• 1.3 讨论23-25
• 1.4 小结25-26
• 二、Rad51C蛋白表达对放/化疗敏感性研究26-46
• 2.1 对象与方法26-34
• 2.1.1 材料与仪器26-28
• 2.1.2 实验方法28-34
• 2.2 结果34-40
• 2.2.1 蛋白印迹方法测定Rad51C-shRNA的基因沉默结果34-35
• 2.2.2 MTT法测定Rad51C-shRNA的基因沉默对细胞增殖影响35-36
• 2.2.3 克隆形成实验检测Rad51C-shRNA的基因沉默对细胞克隆影响36
• 2.2.4 MTT法测定Rad51C表达水平影响顺铂药物对A549细胞的生长增殖36-37
• 2.2.5 Annexin V-APC/PI流式细胞术测定Rad51C表达水平影响顺铂药物对A549细胞的凋亡37-38
• 2.2.6 免疫荧光实验检测Rad51C表达水平影响顺铂药物对A549细胞的DNA损伤38-39
• 2.2.7 克隆形成实验检测Rad51C表达水平影响放疗敏感性39
• 2.2.8 荧光实验检测Rad51C蛋白表达水平影响辐射线对A549细胞的DNA损伤39-40
• 2.3 讨论40-43
• 2.4 小结43-44
• 2.5 问题与展望44-46
• 结论46-48
• 参考文献48-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 附录55-56
• 综述 Rad51C基因在DNA损伤修复中的研究进展56-65
• 综述参考文献61-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

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本文编号：729590