重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其机制

发布时间：2017-08-24 16:30

  本文关键词：重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其机制

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【摘要】：研究目的:研究重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效应及其机制,为重楼活性单体PP-26的临床抗肿瘤应用提供实验室数据支持。研究方法:1.噻唑蓝法(MTT法)检测不同浓度的重楼活性单体PP-26对人肝癌HepG2、胰腺癌SW1990、前列腺癌LNCaP及人正常肝L02细胞的增殖抑制作用,以及采用IC20浓度的PP-26联合不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌HepG2细胞的药物敏感性检测;2.Hoechst 33258染色法检测重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞凋亡的形态学的改变;Annexin V-FITC/PI双染色法检测重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞凋亡的影响;3.碘化丙锭(PI)单染流式细胞仪检测重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞周期的影响;4.蛋白免疫印迹法(Western blotting法)检测重楼活性单体PP-26对肝癌HepG2细胞凋亡相关蛋白、Bcl-2家族蛋白和细胞周期相关蛋白表达水平的影响,以及对Akt信号通路相关蛋白表达水平的影响。研究结果:1.MTT法检测显示,重楼活性单体PP-26能显著抑制肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP细胞增殖,并呈剂量-效应关系,而对人正常肝L02细胞的毒性相对较小。不同浓度的PP-26作用于肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP细胞24 h的IC50分别为:6.94±0.72,2.53±0.14,4.20±0.37μmol/L;不同浓度的PP-26作用于人正常肝L02、肝癌Hep G2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP细胞48 h的IC50分别为:6.98±0.99,1.91±0.45,1.90±0.07,2.45±0.11μmol/L;不同浓度的PP-26作用于人正常肝L02、肝癌HepG2、胰腺癌SW1990及前列腺癌LNCaP细胞72 h的IC50分别为:4.22±0.23,1.54±0.06,1.57±0.09,2.01±0.07μmol/L,可见PP-26对人正常肝L02细胞的细胞毒作用低于癌细胞;以IC20浓度的PP-26联合不同浓度的5-FU显著增强对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用,提高HepG2细胞对5-FU的敏感性。2.Hochest33258染色检测显示,3.2μmol/L及6.4μmol/L的重楼活性单体PP-26作用于HepG2细胞24 h后,荧光显微镜观察细胞核出现固缩、边聚、碎裂以及凋亡小体形成等凋亡的形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测结果显示,HepG2细胞总凋亡率随着PP-26浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系。3.碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测显示,随着作用于肝癌HepG2细胞的重楼活性单体PP-26浓度的增加,G2期细胞的比例逐渐增加,说明PP-26可以使肝癌HepG2细胞阻滞于G2期;同时Western blotting检测结果显示,细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1及细胞周期依赖蛋白激酶-4(CDK4)表达水平随着PP-26作用浓度的增加而下降,而Myt1、p21、p-cdc2(Tyr15)表达增高,说明细胞周期阻滞于G2期。4.Western blotting结果显示,在肝癌HepG2细胞中,凋亡相关蛋白caspase 9、caspase 3、PARP随着PP-26浓度的增加表达下调,促凋亡蛋白Bax的表达上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1表达下调;同时,随着PP-26作用浓度的增加,磷酸化的Akt(p-Akt)的表达下调而总Akt表达变化不明显,Akt下游的GSK3β和Foxo3磷酸化水平也下降,说明重楼活性单体PP-26通过抑制Akt信号通路激活细胞线粒体凋亡途径而诱导Hep G2细胞凋亡。结论:1.重楼活性单体PP-26可在体外显著抑制肝癌HepG2、胰腺癌SW1990、前列腺癌LNCaP细胞增殖,而对正常人肝LO2细胞的增殖抑制作用不明显,并能够提高肝癌HepG2细胞对氟尿嘧啶的敏感性。2.重楼活性单体PP-26诱导肝癌HepG2细胞周期阻滞于G2期。3.重楼活性单体PP-26可能通过抑制Akt信号通路,激活细胞线粒体凋亡途径而诱导肝癌HepG2细胞凋亡。
【关键词】：重楼 肝癌 细胞凋亡 细胞周期 Akt
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-25
• 实验材料和方法25-37
• 实验结果37-47
• 讨论47-51
• 结论51-52
• 展望及不足52-53
• 缩略词表53-54
• 参考文献54-58
• 发表文章58-59
• 致谢59

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本文编号：732367