SPIO-ShRNA探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度及外加磁场对其转染率的影响

发布时间：2017-08-24 22:34

  本文关键词：SPIO-ShRNA探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度及外加磁场对其转染率的影响

  更多相关文章： 分子探针 RNAi SKOV3细胞 最佳浓度 分子探针 磁场 SKOV3细胞 转染

【摘要】：第一部分SPIO-ShRNA双功能分子探针体外转染卵SKOY3细胞的最佳浓度研究目的：不同质量浓度的SPIO-ShRNA双功能分子探针体外转染卵巢癌SKOV3细胞,通过观察细胞形态及EGFR表达,寻找分子探针最佳转染浓度。方法：将探针铁浓度分别为5mg/L、15mg/L、30mg/L、45mg/L、 75mg/L、100mg/L转染SKOV3细胞后,采用荧光显微镜观察探针表达情况,透射电镜及普鲁士蓝染色直接观察细胞形态改变及细胞内铁颗粒的分布,应用原子吸收光谱仪法测量细胞内铁含量,流式细胞术观察细胞凋亡情况,CCK-8检测SKOV3细胞活性,western-blot法检测SKOV3细胞内EGFR蛋白的表达,细胞内T2*WI信号强度的改变应用MR扫描检测。结果：在一定铁浓度范围内(5mg/L-30mg/L),细胞内铁含量随探针浓度增加而逐渐增大,当探针铁浓度为45mg/L时,探针进入SKOV3细胞量达到饱和,标记率接近100%,细胞活性下降,细胞存活率减低,细胞内蛋白表达受到抑制(P均0.01),MR横断扫描图像显示T2*WI信号强度明显降低(P0.01)。结论：SPIO-ShRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞时,最优转染浓度为45mg/L,特异性抑制卵巢癌细胞的表达,并能被MR成像所检测,初步证实具有诊断与特异性治疗的双重功效。第二部分外加磁场对SPIO-ShRNA双功能分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响目的：探讨外加磁场对SPIO-ShRNA双功能分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法：质量浓度为45mg/L分子探针转染卵巢癌细胞时,并将SKOV3细胞分为3组：未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-ShRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-ShRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。流式细胞仪检测卵巢癌SKOV3细胞转染率,CCK-8观察细胞增殖及活性,荧光定量PCR以及western-blot分别检测表皮生长因子受体(EGFR) mRNA及蛋白表达量,磁共振(MR)扫描检测各组细胞内T2*WI信号强度变化。结果：与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P-0.001)；实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均0.01)；实验组的MR图像信号强度明显降低(P=0.0004)。结论：外加磁场可以诱导SPIO-ShRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高其转染率。
【关键词】：分子探针 RNAi SKOV3细胞 最佳浓度 分子探针 磁场 SKOV3细胞 转染
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31;R445.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 参考文献14-16
• 第一部分 SP10-ShRNA双功能分子探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度研究16-32
• 1 材料与方法16-19
• 2 结果19-29
• 3 讨论29-30
• 参考文献30-32
• 第二部分 外加磁场对SP10-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响32-41
• 1 材料及方法32-34
• 2 结果34-38
• 3 讨论38-39
• 参考文献39-41
• 全文总结41-43
• 文献综述43-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士学位期间发表文章目录52
• 攻读硕士学位期间参加会议52

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本文编号：733451