生长抑制因子4对大肠癌细胞生长和侵袭的作用及其机制

发布时间：2017-08-27 00:17

  本文关键词：生长抑制因子4对大肠癌细胞生长和侵袭的作用及其机制

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【摘要】：目的:探索生长抑制因子4(ING4)对大肠癌细胞生长和侵袭的作用及其机制。方法:运用q RT-PCR方法检测人高转移大肠癌(CRC)细胞系Lo Vo和SW620、低转移CRC细胞系LS174T和SW480以及正常大肠粘膜上皮细胞FHC中ING4m RNA的表达水平。以携带人源化ING4编码序列的p Ad Track-CMV/ING4质粒为模板,PCR扩增ING4片段,在Nhe I、Sgs I酶切位点间插入至p Lenti6.3/IRES/GFP慢病毒质粒构建p Lenti6.3/ING4/IRES/GFP。然后p Lenti6.3/ING4/IRES/GFP、对照p Lenti6.3//IRES/GFP分别与辅助包装质粒p LP1、p LP2、VSVG用脂质体Lipofectamine2000共转染293T细胞制备ING4重组慢病毒(LV-ING4)、对照空病毒(LV)并滴度测定。LV-ING4、LV以10 MOI剂量感染高转移Lo Vo CRC细胞,通过杀稻瘟菌素(BSD)筛选后获得Lo Vo-LV-ING4(简写为Lo Vo-ING4)、Lo Vo-LV(简写为Lo Vo-Mock),并在荧光显微镜下观察GFP分析转基因效率,RT-PCR、Western blot检测ING4的表达。利用MTT实验、细胞周期实验、Transwell侵袭实验检测ING4对Lo Vo CRC细胞体外生长、细胞周期、侵袭的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,监测肿瘤体积、重量,分析ING4对Lo Vo CRC细胞裸鼠体内生长的作用。采用Western blot检测细胞周期相关蛋白P21、Cyclin E、CDK2和上皮间充质转化(EMT)相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail1、Snail2、ZEB1、Twist的表达。免疫组化检测裸鼠皮下移植瘤CD31的表达和微血管密度(MVD)。ELISA检测Lo Vo CRC细胞上清中IL-6、IL-8、VEGF的分泌水平。结果:1)ING4在CRC细胞中表达显著下调;2)慢病毒介导ING4过表达抑制Lo Vo CRC细胞体外和裸鼠体内生长;3)ING4通过上调P21、下调Cyclin E诱导Lo Vo CRC细胞周期G1期阻滞;4)ING4通过下调IL-6、IL-8、VEGF促血管生成因子的表达抑制肿瘤血管生成;5)ING4通过下调Snail1EMT诱导转录因子(EMT-TF)、N-Cadherin和Vimentin间充质标志物及上调E-Cadherin上皮标志物,进而抑制Lo Vo CRC的侵袭。结论:ING4能够通过调控Lo Vo CRC细胞G1期检查点关键分子的表达诱导G1期阻滞,及减少促血管生成因子的分泌参与抑制肿瘤血管生成,进而抑制Lo Vo CRC细胞的生长。ING4还能够通过下调EMT-TF Snail1、逆转EMT抑制Lo Vo CRC细胞的侵袭、转移。
【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-10
• 材料10-13
• 方法13-23
• 结果23-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述43-50
• 参考文献47-50
• 攻读学位期间公开发表的论文50-51
• 中英文对照缩略词表51-52
• 致谢52-53

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本文编号：743442