非小细胞肺癌DNMT1与抑癌基因启动子甲基化及表达的研究

发布时间：2017-08-27 01:34

  本文关键词：非小细胞肺癌DNMT1与抑癌基因启动子甲基化及表达的研究

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【摘要】：目的:DNA甲基化是由DNA甲基转移酶1催化(DNMT1)的一种表观遗传学上的DNA修饰酶。本研究的目的是探讨人非小细胞肺癌细胞株在离体及在体生长下DNMT1基因、蛋白的表达及其对抑癌基因甲基化状态的影响。方法:人肺鳞癌细胞株A549,H838在体外生长并种植于裸鼠皮下成瘤,两种细胞株均使用DNA甲基转移酶抑制剂(5-AZA-CdR)和/或组蛋白脱乙酰酶抑制剂(MS-275)进行治疗治疗,即分为四组:对照组、5-AZA-CdR单独治疗组、MS-275单独治疗组及联合治疗组。表观治疗结束后,收集细胞,分别提取总DAN、蛋白及RNA。DNMT1及肿瘤抑癌基因(RASSF1A,ASC,APC,MGMT,CDH13,DAPK,ECAD,P16,GATA4等)蛋白水平的表达用Western blotting进行检测;DNMT1及肿瘤抑癌基因转录水平的表达用RT-qPCR进行检测;肿瘤抑癌基因(RASSF1A,ASC,APC,MGMT,CDH13,DAPK,ECAD,P16,GATA4等)启动子区甲基化状态利用甲基化特异性PCR(MSP)进行检测;细胞的生长使用CCK-8进行检测。结果:第一部分1.经5-AZA-CdR和MS-275的表观治疗后非小细胞肺癌细胞DNMT1基因m RNA的表达降低。2.在非小细胞肺癌细胞中5-AZA-CdR和MS-275的表观遗传学治疗可抑制DNMT1蛋白水平的表达。3.在非小细胞肺癌细胞中表观遗传治疗可导致抑癌基因发生去甲基化,从而使相关抑癌基因恢复表达。4.在非小细胞肺癌细胞中表观遗传治疗可抑制其增殖。第二部分:1.在裸鼠体内,5-AZA-CdR及MS-275的表观遗传治疗可明显抑制肿瘤组织的生长。2.在裸鼠体内,5-AZA-Cd及MS-275的表观遗传治疗可使抑癌基因RASSF1A、ASC及APC发生去甲基化,从而恢复其表达。结论:经DNA甲基化治疗后随着DNMT1表达的降低,肿瘤抑癌基因的甲基化状态受DNMT1基因的调控。在裸鼠,肿瘤抑癌基因(APC,ASC,RASSF1A)的去甲基化抑制肿瘤组织的生长。本研究的结果支持在非小细胞肺癌中DNA甲基化可作为一种潜在的表观遗传临床预后或治疗反应的生物学标志,并且DNMT1可作为一个潜在的治疗靶点。
【关键词】：DNA甲基化 DNMT1 表观遗传 非小细胞肺癌 抑癌基因
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英汉缩略词对照表8-10
• 前言10-14
• 第一部分 表观治疗对NSCLC细胞株抑癌基因甲基化状态及DNMT1表达的影响14-32
• 1 材料与方法14-24
• 3 结果24-29
• 4 讨论29-31
• 5 结论31-32
• 第二部分 人NSCLC细胞株在体生长条件下对裸鼠成瘤、抑癌基因甲基化及表达的影响32-39
• 1 材料与方法32-35
• 2 结果35-38
• 3 讨论38-39
• 4 结论39
• 参考文献39-44
• 综述44-53
• 参考文献49-53
• 攻读学位期间发表的学术论文目录53-54
• 致谢54-55

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本文编号：743763