miR-375在结直肠癌中的调控机制研究

发布时间：2017-08-27 04:03

  本文关键词：miR-375在结直肠癌中的调控机制研究

  更多相关文章： 结直肠癌 miR-375 JAK2/STAT3信号途径 MAP3K8/ERK信号途径

【摘要】：结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是发生在大肠粘膜上皮的恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率呈全球性上升。CRC的早期诊断与治疗可显著提高生存率,因此寻找特异性的CRC肿瘤标记物,及研究其发病机理有一定的现实意义。 microRNA (miRNA)是生物体内源性非编码RNA,与诸多恶性肿瘤的发生与迁移密切相关,具有作为肿瘤标记物及治疗靶标的潜力。在结直肠癌中,我们发现miR-375在肿瘤组织中的表达显著低于癌旁组织,但它是否参与结直肠癌的调控及其作用机制尚不清楚。因此,我们首先从多个数据库搜集miR-375的预测靶基因及其作用通路,筛选出JAK2/STAT3、MAP3K8/ERK及ATG7/LCIII信号途径。然后以结直肠癌细胞株HT29, HCT116, Caco2为材料,通过基因工程技术瞬时和稳定表达miR-375后,发现在分子水平上miR-375确实通过下调靶基因JAK2和MAP3K8,抑制了下游的STAT3和ERK1/2蛋白的磷酸化水平；但miR-375并未通过靶标ATG7/LCIII参与调控自噬途径。细胞增殖实验表明,miR-375在一定程度上抑制了细胞增殖及迁移能力；进一步的个体成瘤实验发现,注射空载体HCT116细胞的裸鼠在15天形成肿瘤,且肿瘤体积随时问增大,而注射miR-375稳定表达的HCT116细胞的裸鼠在35天均无肿瘤形成。 综上所述,miR-375在结直肠癌中表达下调,并且通过JAK2/STAT3和MAP3K8/ERK而非ATG7/LCIII信号途径参与细胞的增殖和迁移。此结论为将miR-375作为结直肠癌的诊断标记及治疗的靶标分子,在临床应用上提供了一定的理论依据。
【关键词】：结直肠癌 miR-375 JAK2/STAT3信号途径 MAP3K8/ERK信号途径
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 缩略词对照表6-7
• 目录7-9
• 第一章 前言9-19
• 1.1 结直肠癌现状及诊断9-10
• 1.2 STAT3、ERK与结直肠癌关系10-12
• 1.2.1 STAT3与肿瘤的发生10-12
• 1.2.2 ERK与肿瘤的发生12
• 1.3 microRNA研究现状12-16
• 1.3.1 microRNA形成12-14
• 1.3.2 microRNA作用机制14-15
• 1.3.3 microRNA与肿瘤的关系15
• 1.3.4 microRNA与结直肠癌诊断15-16
• 1.3.5 miR-375与消化道癌症16
• 1.4 miR-375作用机制16-19
• 1.4.1 miR-375与靶基因16-17
• 1.4.2 miR-375与JAK2/STAT3、MAPK/ERK通路17-19
• 1.5 研究的目的及意义19
• 第二章 . 材料与方法19-37
• 2.1 实验材料19-22
• 2.1.1 过表达质粒19-20
• 2.1.2 细胞株20
• 2.1.3 主要试剂耗材20-21
• 2.1.4 主要仪器21-22
• 2.2 实验方法22-37
• 2.2.1 miR-375瞬时过表达载体构建22-30
• 2.2.2 构建miR-375稳定转染细胞株30-32
• 2.2.3 Western Blot检测miR-375调控的蛋白变化32-35
• 2.2.4 miR-375对细胞增殖及迁移的影响35-36
• 2.2.5 划痕实验检测miR-375对细胞迁移增殖能力的影响36-37
• 2.2.6 裸鼠成瘤实验37
• 第三章 . 结果与分析37-51
• 3.1 miR-375靶标基因分析结果37-38
• 3.2 pRNAT-CMV3.2/puro-miR375载体的构建38-40
• 3.2.1 HEK293T细胞基因组DNA提取38
• 3.2.2 梯度PCR扩增目的条带38-39
• 3.2.3 菌落PCR检测片段连接39
• 3.2.4 测序结果39-40
• 3.3 pRNAT-CMV3.2/puro-miR375瞬时转染结果40-41
• 3.4 miR-375稳定高表达细胞株构建及检测41-44
• 3.5 Western Blot检测蛋白水平44-46
• 3.6 MTS法和细胞计数法检测细胞增殖46-47
• 3.7 划痕实验检测miR-375对细胞迁移能力的影响47-48
• 3.8 裸鼠成瘤实验48-51
• 第四章 . 讨论51-53
• 第五章 . 结论53-55
• 5.1 hsa-miR-375过表达载体及稳转细胞株的构建53
• 5.2 miR-375对JAK2/STAT3信号通路的抑制53
• 5.3 miR-375对MAPK/ERK信号通路的抑制53
• 5.4 miR-375对细胞增殖能力的影响53-54
• 5.5 miR375对细胞迁移增殖能力的影响54
• 5.6 miR375抑制裸鼠的肿瘤形成54-55
• 附录一相关试剂配制方法55-56
• 附录二56-58
• 参考文献58-62
• 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：744253