NS-398逆转结肠癌细胞多药耐药作用研究

发布时间：2017-08-27 21:14

  本文关键词：NS-398逆转结肠癌细胞多药耐药作用研究

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【摘要】：结肠癌是严重威胁人类生命健康的常见病、多发病,且起病隐匿,早期诊断率低。近年来,结肠癌的发病率呈明显上升趋势,已跃居恶性肿瘤死亡的第四位。目前,其治疗方式仍是以手术、放疗和化疗为主,其中化疗在其治疗中占据重要地位。但是,在化疗过程中肿瘤多药耐药(multi-drug resistance,MDR)频发,严重影响了化疗效果甚至导致化疗失败,从而导致肿瘤复发或/和转移,成为肿瘤化疗中一个非常棘手的问题。因此,多药耐药是目前化疗中需要克服的最大难点。本课题以结肠癌耐药细胞株HCT-8/FU为研究对象,观察环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对癌细胞耐药性的逆转作用及其对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance related protein,MRP)、COX-2的调控,以初步探讨其可能作用机制。通过CCK-8法检测NS-398对HCT-8/FU的毒性作用及对MDR的逆转作用;通过Caspase 3活性检测试剂盒和Hoechst33342染色观察药物诱导细胞凋亡情况;ELISA法检测NS-398作用前后培养液中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)含量的变化;免疫细胞化学法检测NS-398作用前后结肠癌耐药细胞P-gp、MRP和COX-2的表达变化。通过上述研究探讨以下几个问题:探讨COX-2选择性抑制剂NS-398、5-FU的剂量对耐药细胞的毒性作用,并明确NS-398以何种有效剂量逆转结肠癌细胞的多药耐药性;COX-2选择性抑制剂作为结肠癌等常见消化道恶性肿瘤化疗耐药逆转剂,探讨NS-398是否能够抑制HCT-8/FU细胞膜表面的P-gp、MRP和细胞浆中COX-2的表达及是否能够降低细胞液中PGE2的含量,以初步探讨其逆转耐药的分子机制。结果发现,10、20μmol·L-1 NS-398作用于HCT-8/FU细胞24h后,HCT-8/FU细胞的生长抑制率分别为5%、8%,差异具有显著性(P0.01),对癌细胞均无明显毒性,而与不同浓度5-FU合用后,HCT-8/FU细胞对5-FU敏感性增加,耐药逆转倍数分别为2.831倍、7.629倍;通过Caspase 3活性检测试剂盒测得20μmol·L-1 NS-398+320μg·mL-1 5-FU组Caspase 3活性增加百分比为386.11%,较320μg·mL-1 5-FU组的179.94%、20μmol·L-1 NS-398组的125.23%显著增加(P0.05);Hoechst 33342染色结果同样显示两药联用组HCT-8/FU细胞核呈致密浓染,细胞凋亡较单独用药组增加;10μmol·L-1、20μmol·L-1 NS-398作用HCT-8/FU细胞24h后,ELISA法测得HCT-8/FU细胞培养上清液中PGE2含量分别为189.437ng·L-1、151.282ng·L-1,较0μmol·L-1 NS-398时的321.659ng·L-1显著下降(P0.05);免疫细胞化学法研究结果发现20μmol·L-1NS-398作用24h后,HCT-8/FU细胞膜表面P-gp、MRP表达均由强阳性变为弱阳性,HCT-8/FU细胞浆中COX-2表达由中阳性变为弱阳性。研究结果表明,COX-2选择性抑制剂NS-398对结肠癌细胞耐药性有显著的逆转作用,能够增强HCT-8/FU细胞对5-FU的敏感性,其逆转机制可能是在抑制COX-2表达的同时抑制P-gp、MRP的表达,减少化疗药物的外排,其次NS-398能够抑制PGE2生成,从而恢复了机体的抗肿瘤免疫反应,使耐药细胞重新恢复对化疗药物的敏感性,充分发挥化疗药物的临床疗效,将为我国结直肠癌患者提供一条新的治疗途径。
【关键词】：多药耐药 结肠癌 P-糖蛋白 多药耐药相关蛋白 环氧化酶-2选择性抑制剂
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-20
• 结果20-22
• 附图22-25
• 附表25-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述 消化道肿瘤耐药机制研究37-55
• 参考文献48-55
• 致谢55-56
• 个人简历56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：745888