乳腺癌中MTH1的表达分析及影响上皮间质转化的机制研究

发布时间：2017-08-29 13:33

  本文关键词：乳腺癌中MTH1的表达分析及影响上皮间质转化的机制研究

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【摘要】：研究背景:以往的研究已证实MTH1可以修复活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)造成的损伤,在多种肿瘤细胞中具有较高水平,但是否存在于乳腺癌细胞并对其生物学行为产生影响,尚没有具体的研究。研究目的:本研究首先探讨MTH1在不同恶性程度的乳腺癌细胞系中的表达情况。随后探究MTH1对于乳腺癌细胞包括迁移能力、侵袭能力以及增殖能力在内的生物学行为的影响。最后分析MTH1对乳腺癌细胞发生上皮间质转化(Epithelial to mesenchymal transition,EMT)的作用。研究方法:本研究首先利用Western Blot、Real-time PCR等方法,探究MTH1在乳腺癌不同恶性程度细胞系中的表达情况,筛选出MTH1高表达与低表达的细胞系。随后构建MTH1过表达质粒,转染MTH1低表达细胞系,并结合si RNA转染MTH1高表达细胞系,通过MTT比色法、平板克隆形成实验、Edu细胞增殖实验以及Transwell迁移实验分析MTH1对于乳腺癌细胞增值能力、迁移能力和侵袭能力等生物学行为的影响。最后通过Western Blot和免疫荧光等实验方法探讨MTH1对乳腺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)的作用。研究结果:通过研究发现MTH1在乳腺癌细胞中的表达水平要明显高于其在正常乳腺上皮细胞中的表达,并且随着乳腺癌细胞系恶性程度的提高表达水平呈上升趋势。通过转染MTH1过表达质粒进入MCF-7(MTH1低表达细胞系)提高MTH1的表达水平和转染siRNA进入MDA-MB-231(MTH1高表达细胞系)抑制MTH1的表达,从正方两方面证明MTH1的表达可以促进乳腺癌细胞的迁移和增值能力,从而提高乳腺癌的生物学恶性程度。除此之外,MTH1还可以上调间质标志蛋白N-cadherin和Vimentin,下调上皮标志蛋白E-cadherin和cytokeratin,促进乳腺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)。研究结论:MTH1在乳腺癌细胞中高表达,并且表达水平与肿瘤细胞恶性程度成正相关。此外,MTH1还可促进乳腺癌细胞迁移运动、增殖以及发生上皮间质转化(EMT)。因此MTH1是一种促进乳腺肿瘤发生并提高其生物学恶性程度的物质。
【关键词】：MTH1 乳腺癌 迁移 增殖 上皮间质转化
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、MTH1在乳腺癌中高表达14-25
• 1.1 对象和方法14-21
• 1.1.1 细胞系14
• 1.1.2 抗体与试剂14-15
• 1.1.3 耗材与仪器设备15-16
• 1.1.4 实验所需试剂的配置16-18
• 1.1.5 实验步骤18-21
• 1.2 结果21-23
• 1.2.1 MTH1在乳腺癌中的表达水平升高21-22
• 1.2.2 MTH1在不同乳腺癌细胞系中表达水平不同22-23
• 1.3 讨论23-24
• 1.3.1 MTH1在乳腺癌中的表达水平升高23
• 1.3.2 MTH1在不同乳腺癌细胞系中表达水平不同23-24
• 1.4 小结24-25
• 二、MTH1促进乳腺癌细胞的增殖与迁移25-47
• 2.1 对象和方法25-38
• 2.1.1 细胞系25
• 2.1.2 抗体与试剂25-26
• 2.1.3 耗材与仪器设备26-27
• 2.1.4 实验所需试剂的配置27-28
• 2.1.5 实验步骤28-38
• 2.2 结果38-45
• 2.2.1 提高MTH1的表达水平可促进乳腺癌细胞的增殖和迁移38-42
• 2.2.2 降低MTH1的表达水平可抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移42-45
• 2.3 讨论45-46
• 2.4 小结46-47
• 三、MTH1诱导乳腺癌细胞发生EMT47-52
• 3.1 对象和方法47-49
• 3.1.1 细胞系47
• 3.1.2 抗体与试剂47
• 3.1.3 耗材与仪器设备47
• 3.1.4 实验所需试剂的配置47-48
• 3.1.5 实验步骤48-49
• 3.2 结果49-50
• 3.3 讨论50-51
• 3.4 小结51-52
• 结论52-53
• 参考文献53-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 综述 MTH1在肿瘤形成及生存中的作用57-66
• 综述参考文献62-66
• 致谢66-67
• 个人简历67

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本文编号：753562