人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的影响

发布时间：2017-08-30 20:34

  本文关键词：人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的影响

  更多相关文章： 尿激酶型纤溶酶原激活物 基质金属蛋白酶-2 人脐带间充质干细胞 食管癌

【摘要】：背景食管癌是消化道常见的恶性肿瘤,发病率高,占世界恶性肿瘤中第八位,在中国居第四位。尽管人们对其进行了长期的研究,包括手术切除、化学治疗及放射治疗等一系列的治疗方案,但其5年生存率仍仅为15%。导致食管癌术后死亡率高的原因很多,术后转移是重要的原因之一。尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator, uPA)能激活纤溶酶及其他多种蛋白溶解酶。它们在肿瘤的侵袭及转移过程中也具有促进作用,因为可以降解阻碍细胞转移的天然屏障细胞外基质(extracellular matrix, ECM)等,给肿瘤细胞清除了转移过程中的阻力。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)具有降解ECM,破坏基膜(basement membranae, BM)完整性的酶系统,在肿瘤细胞侵袭转移中起着非常关键的作用。实验已经证实,人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)裂解液对食管癌细胞EC9706的增殖和迁移均有抑制作用。目的本实验重点是探索hUCMSCs裂解液对食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的表达的影响。为进一步研究抑制作用机理奠定理论基础。为临床应用干细胞抑制食管癌肿瘤转移的治疗方法提供理论依据。方法1.培养食管癌EC9706细胞；2.采用组织块培养法培养hUCMSCs,待细胞传至第3代后流式细胞仪检测细胞表型；3.收集hUCMSCs,用反复冻融法制备hUCMSCs裂解液；4.各个组拥有相同数量的食管癌EC9706细胞,向每组加入不同数量的hUCMSCs裂解液,然后培养60h。使用Western-blot法检测食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的表达变化。结果食管癌细胞EC9706在倒置显微镜下观察其呈多边形,形态多样,细胞核质比较大,细胞核形态不规则,细胞群体排列不规则。hUCMSCs组织块培养法原代培养7-12d后,显微镜下可见梭形或多角形成纤维细胞。随后可以发现hUCMSCs呈成纤维状,漩涡状排列。流式细胞仪分析第3代hUCMSCs可检测到实验组各组细胞CD90、CD 166等MSCs标志物高表达,不表达造血细胞表面特异性标志CD34、CD45。当用hUCMSCs裂解液处理过食管癌EC9706细胞后,uPA在对照组中的表达为0.28075±0.00233,在1/2倍组中的表达为0.28790±0.00176,在1倍组中的表达为0.13782±0.00542,在2倍组中的表达为0.12465±0.01277。MMP-2在对照组中的表达为0.27051±0.01956,在1/2倍组中的表达为0.26698±0.00231,在1倍组中的表达为0.13017±0.01529,在2倍组中的表达为0.11755±0.00982。当加入hUCMSCs数小于食管癌细胞数的裂解液时uPA、MMP-2的表达变化不明显(P0.05),当加入hUCMSCs数大于或等于食管癌细胞数的裂解液时uPA、MMP-2的表达显著降低(P0.05)。结论人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌细胞EC9706的迁移的抑制作用可能与尿激酶型纤溶酶原激活物、基质金属蛋白酶-2有关。
【关键词】：尿激酶型纤溶酶原激活物 基质金属蛋白酶-2 人脐带间充质干细胞 食管癌
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-14
• 1. 材料14-16
• 2 实验方法16-21
• 3 结果21-26
• 4 讨论26-31
• 5 结论31-32
• 参考文献32-36
• 综述：间充质干细胞与肿瘤之间的关系36-53
• 参考文献46-53
• 附录53-54
• 攻读学位期间发表文章情况54-55
• 致谢55-56
• 个人简历56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吴清泉;吴健;陈亮;;MMP-2蛋白在食管磷状细胞癌中的表达及意义[J];南京医科大学学报(自然科学版);2012年09期

，

本文编号：761346