Th17细胞在TL1A调控结肠炎相关结直肠癌中作用的初步研究

发布时间：2017-08-31 20:14

  本文关键词：Th17细胞在TL1A调控结肠炎相关结直肠癌中作用的初步研究

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【摘要】：随着我国炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)发病率的不断攀升,对其机制及并发症防治的研究也正日益成为人们关注的焦点。这其中结肠炎相关结直肠癌(colitis associated colorectal cancer,CAC)是一种与IBD密切相关,最令人担忧的远期并发症,其发生与病变范围、炎症程度、发病年龄、患病时间和结直肠癌家族史等因素有关。研究其发病机制能为临床上有效防治结直肠癌提供有力帮助。CAC是肠道在反复的炎症刺激基础上,不断地增生修复最终由异型增生转变为癌的渐进过程。这其中炎症是其始动因素。作为体内重要促炎因子的白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6),除了参与多种炎症性疾病和自身免疫性疾病的发生外还对肿瘤的发生、发展有重要影响。在围绕结肠炎诱发癌变分子激活的机制研究中发现:细胞因子可以通过与特异性受体结合,增强包括NF-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、WNT、STAT3等在内的转录因子活性,从而发挥对CAC的调控作用。肿瘤坏死因子样配体1A(TNF-like ligand 1 aberrance,TL1A)是新发现的一种肿瘤坏死因子超家族成员,体内、体外的研究均已证实TL1A可以通过促进T细胞和APCs的表型活化,增强单个核细胞分泌Th17型细胞因子活性,上调IL-17、TNF-α和IL-6的表达,促进肠黏膜炎症的发生,参与IBD的起病。那么它作为T细胞的免疫增强子是否会通过促进炎症反应而影响CAC的发生呢?目前尚未有相关文献报道,为此我们利用TL1A过表达的转基因(LCK-CD2-TL1A-GFP-transgenic,L-Tg)小鼠和野生型(wild type,WT)C57BL/6小鼠,建立实验性结肠炎相关结直肠癌模型,研究TL1A在其中的作用以期寻找问题的答案。目的:建立炎症诱导的小鼠结直肠癌模型,了解TL1A在结肠炎相关结直肠癌中的作用。方法:①采用real-time Q-PCR方法进行LCK-CD2-TL1A-GFP基因型小鼠的鉴定与筛选。②通过诱变剂AOM与致炎剂DSS联合诱导的方式建立实验性结肠炎相关结直肠癌模型,将L-Tg小鼠与C57BL/6 WT小鼠(8-12周)分别随机分为Control组、AOM组、DSS组和AOM+DSS组,共8组,每组10只。Control组正常饮食;AOM组在实验第一天接受10 mg/Kg AOM单剂量腹腔注射后正常饮食;DSS组先连续饮用7天浓度为2.5%的DSS,随后14天饮用蒸馏水,以此为一个循环,共饮用4个循环;AOM+DSS组单剂量腹腔注射AOM 10 mg/Kg联合间断饮用4个循环的2.5%DSS。③结肠黏膜炎症程度的评估包括体重变化(Body weight,BW)、疾病活动指数(Disease activity index,DAI)、结肠形态学变化、组织病理学评分和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)检测。④肿瘤形成情况的评估包括计算肿瘤的数目、直径、成瘤率并对异型增生程度进行组织病理学评估。⑤应用Western blot技术检测结肠组织中IL-17A、TNF-α和IL-6蛋白的定量表达。⑥将MPO活性和IL-17A、TNF-α、IL-6的相对表达量分别与肿瘤的数目、大小和异型增生评分做相关性分析。结果:①根据基因LCK-CD2-TL1A-GFP序列测定小鼠DNA,Tg小鼠目的基因成像在192 bp位置,而WT小鼠基因测定成像,在192 bp位置未检测到目的基因,据此筛选鉴定Tg小鼠;②与Control组和AOM组相比,转基因小鼠和野生型小鼠的DSS组和AOM+DSS组小鼠体重均有减轻,DAI评分显著升高,AOM+DSS/Tg组比AOM+DSS/WT组升高更明显(2.3±0.76 vs 1.28±0.47,P0.05);大体形态显示:DSS组结肠肠壁充血、水肿,AOM+DSS组肠壁增厚并出现肠腔狭窄、扭曲;光镜下可见DSS组结肠组织有大量炎症细胞浸润,黏膜上皮破坏形成浅溃疡,病理评分显著增加,AOM+DSS组可见腺体扭曲变形,细胞大小不等,形态不一,核大深染,呈异型性增生。MPO结果显示:WT和Tg小鼠的Control组和AOM组间MPO活性均无明显差异,而与Control组和AOM组相比,DSS组、AOM+DSS组小鼠结肠MPO明显升高,DSS/Tg、AOM+DSS/Tg较DSS/WT、AOM+DSS/WT组升高更明显;③计算肿瘤的数目、大小和成瘤率,与野生型鼠比较,AOM+DSS/Tg组瘤体数目增多(5.62±1.30 vs 3.5±1.19,P0.05)、直径增大(2.98±0.79 vs 2.08±0.37,P0.05),成瘤率明显增高(88.9%vs 66.7%)且异型增生的组织病理学评分明显增高(2.75±0.5 vs 1.7±0.8,P0.05);④用Western blot检测IL-17A、TNF-α和IL-6表达,结果显示:与Control组和AOM组相比,WT和Tg小鼠的DSS组、AOM+DSS组IL-17A、TNF-α和IL-6表达水平显著升高(P0.05),AOM+DSS/Tg组比AOM+DSS/WT升高明显,差异具有统计学意义(P0.05)⑤MPO活性与肿瘤的数目、大小呈正相关(r=0.6,r=0.55,P0.05);IL-17A、TNF-α、IL-6的相对表达量均与肿瘤的数目和异型增生评分呈显著性正相关(P0.05),IL-17A、TNF-α同时还与肿瘤的大小呈正相关(P0.05)。结论:TL1A过表达会促进结肠炎相关结直肠癌的进程,其机制可能与TL1A促进Th17细胞分泌炎症因子IL-17A、TNF-α和IL-6有关。
【关键词】：肿瘤坏死因子样配体1A 炎症性肠病 结肠炎相关结直肠癌 炎症因子 Th17细胞
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34;R574.62
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-28
• 附图28-37
• 讨论37-41
• 结论41-42
• 参考文献42-45
• 综述 细胞因子及相关信号通路在结肠炎相关结直肠癌中的作用与机制研究新进展45-54
• 参考文献51-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

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本文编号：767671