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CTP-FoxM1抗原负载的DC疫苗对小鼠FoxM1阳性肝癌皮下模型的免疫治疗效应

发布时间:2017-08-31 21:18

  本文关键词:CTP-FoxM1抗原负载的DC疫苗对小鼠FoxM1阳性肝癌皮下模型的免疫治疗效应


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【摘要】:目的:体外培养Hepa1-6小鼠肝癌细胞株,了解FoxM1作为肿瘤抗原在该细胞株中蛋白的表达水平,探讨Hepa1-6细胞用于小鼠Fox M1阳性肝癌皮下模型建立的可能性;摸索Hepa1-6细胞建立C57BL/6小鼠FoxM1阳性皮下肝癌的最佳条件;并探讨CTP-FoxM1负载的DC疫苗对小鼠FoxM1阳性皮下肝癌的免疫治疗作用。方法:在37℃、5%CO2孵箱中,采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基(1%青链霉素)培养小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,收集对数生长期Hepa1-6肝癌细胞,RIPA裂解液(强)提取Hepa1-6细胞总蛋白,western blot方法鉴定FoxM1在小鼠肝癌细胞系Hepa1-6中的表达水平。于C57BL/6小鼠右胁腹皮下注射浓度分别5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的Hepa1-6细胞0.1ml,观察小鼠皮下肿瘤生长情况并每两天测量瘤体体积,绘制皮下肝癌的生长曲线,摸索小鼠皮下成瘤的最适条件;HE染色鉴定皮下肿瘤组织,同时Western blot检测肿瘤组织中FoxM1的表达情况。以浓度为1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1转导DC48h制成疫苗,注射于荷瘤小鼠左胁腹皮下,测量并记录小鼠皮下肝癌瘤体的变化情况,病理检查确定肿瘤在肺、肝、脾等脏器的转移情况,ELISA试剂盒检测小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平,最终评估ctp-foxm1负载的dc疫苗对小鼠皮下肝癌的免疫治疗效应。此外,我们还采用elisa方法检测了78例phc患者血清中cxcl13的表达情况,回顾性分析患者临床病理特征和实验室检查指标并探讨cxcl13在肝癌中临床意义。结果:hepa1-6小鼠肝癌细胞中高表达foxm1,可以用来建立foxm1阳性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml浓度的hepa1-6细胞0.1ml荷瘤c57bl/6小鼠,建模时间短、成功率较高,he染色多见病理性核分裂,肿瘤内微血管丰富,与临床hcc类似,为观察后续dc疫苗在小鼠体内的的抗肿瘤免疫效应奠定了基础。ctp-foxm1抗原负载的dc疫苗治疗hepa1-6肝癌细胞荷瘤小鼠,小鼠肿瘤生长受到抑制,且与ctp、foxm1、pbs负载的dc疫苗对照组相比,皮下瘤体积和肿瘤重量均更小,差异具有统计学意义。ctp-foxm1组小鼠血清中细胞因子ifn-γ、il-2的表达量与其他组无统计学差异(p0.5),he病理检查正常低表达foxm1的小肠未发现炎症以及组织损伤。原发性肝癌患者血清cxcl13表达水平明显高于健康人,并且与肿瘤大小、转移、tnm分期密切相关。结论:hepa1-6细胞为foxm1阳性的小鼠肝癌细胞株,可用于foxm1阳性小鼠皮下肝癌的建立。0.1ml浓度为3x107/ml的hepa1-6细胞可以在c57bl/6小鼠体内建立稳定的皮下移植瘤,为肝癌的治疗提供理想的动物模型。ctp-foxm1抗原负载的dc疫苗对小鼠皮下移植瘤显示出免疫治疗效应,且明显高于单独的foxm1负载的dc疫苗组,说明有ctp负载系统的dc疫苗能更好激活抗肿瘤免疫反应,杀伤肿瘤,且对机体无明显的毒副作用,安全可靠。CXCL13可作为PHC患者的诊断和预后评估的血清学标志物。
【关键词】:肝癌 CTP-FoxM1 DC疫苗 Hepa1-6细胞 CTL效应
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R735.7;R-332
【目录】:
  • 英汉缩略语名词对照5-7
  • 中文摘要7-10
  • 英文摘要10-13
  • 前言13-16
  • 第一部分 Hepa1-6 细胞培养及FoxM1表达鉴定16-24
  • 1 材料16-18
  • 2 方法18-21
  • 3 结果21-23
  • 4 讨论23-24
  • 第二部分 小鼠皮下肝癌模型的建立24-30
  • 1 材料24-25
  • 2 方法25-26
  • 3 结果26-28
  • 4 讨论28-30
  • 第三部分 DC疫苗对小鼠皮下肝癌的免疫治疗效应30-38
  • 1 材料30-31
  • 2 方法31-33
  • 3 结果33-37
  • 4 讨论37-38
  • 第四部分 CXCL13在原发性肝癌患者血清中的表达及临床意义38-47
  • 1 材料38
  • 2 方法38-39
  • 3 结果39-46
  • 4 讨论46-47
  • 全文总结47-49
  • 参考文献49-54
  • 文献综述54-62
  • 参考文献58-62
  • 致谢62-63
  • 攻读学位期间撰写和发表的学术论文63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号:767978

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