硫酸软骨素共价修饰PAMAM传递miR-34a治疗CD44阳性肿瘤的研究

发布时间：2017-09-01 08:07

  本文关键词：硫酸软骨素共价修饰PAMAM传递miR-34a治疗CD44阳性肿瘤的研究

  更多相关文章： CD44 miR-34a 肿瘤 硫酸软骨素 PAMAM

【摘要】：microRNA （miRNA）是非编码，具有调节功能的小片段RNA。microRNA-34a (miR-34a)是研究较为深入的miRNA，位于p53信号通路下游，在大多数肿瘤细胞中被显著下调。增加细胞内的miR-34a可以通过靶向Notch-1和Bcl-2的mRNA抑制肿瘤细胞的增殖、迁移并且诱导细胞凋亡。为了提高miR-34a的细胞递送效率，构建靶向型、高效性的递释系统。聚酰胺胺（PAMAM）是高效率低毒性的细胞转染生物纳米载体，但是其缺乏靶向性，不能有效的聚集在肿瘤部位。硫酸软骨素是内源性多糖，对在许多实体瘤细胞膜过表达的CD44蛋白具有很高的亲和性。因此，本文用硫酸软骨素共价修饰PAMAM，形成新的靶向CD44阳性肿瘤细胞的纳米载体，高效率的递送miR-34a。 硫酸软骨素通过迈克尔加成反应和PAMAM纳米载体共价结合，形成PAMAMCS纳米载体，并且经核磁1H谱验证其合成。PAMAMCS和miR-34a通过静电作用组装成纳米复合物PAMAMCS/miR-34a，粒径和电位分别是112.5nm和+16.5mV。在质量比8:1时，PAMAMCS完全装载miR-34a，并且保护核酸免受血清的降解。PAMAMCS/miR-34a通过CD44和网格蛋白双重细胞内吞机制高效率把miR-34a传递进入CD44高表达的肿瘤细胞系。经过PAMAMCS/miR-34a的转染，p53缺失型的前列腺癌细胞系PC-3和胰腺癌细胞系MIApaca-2的早期凋亡细胞比率分别是29.61%和21.19%，p53野生型细胞系A549早期凋亡细胞是12.1%；蛋白免疫印迹发现，转染了PAMAMCS/miR-34a的三种细胞， Bcl-2的表达量下调，与凋亡相关的Procaspase-3，PARP-1被激活剪切。转染了PAMAMCS/miR-34a的三种肿瘤细胞的细胞周期中G1期所占比例上升；并且Transwell实验和划痕实验结果显示，PAMAMCS/miR-34a样品组的肿瘤细胞增殖率和迁移率相比于阴性都显著的下降。本实验合成的PAMAMCS纳米载体物理化学性质稳定，，保护核酸免受血清降解，并且通过网格蛋白和CD44双重胞吞机制进入细胞。通过静电作用组装的PAMAMCS/miR-34a纳米复合物可以诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，阻滞细胞周期在G1期。并且研究发现，miR-34a虽然位于p53信号通路下游，但是不依赖于p53蛋白，独立调控下游信号通路。本研究在肿瘤的靶向治疗提供了材料基础，并为抑制肿瘤的多药耐药性和靶向肿瘤干细胞的治疗提供了理论基础。
【关键词】：CD44 miR-34a 肿瘤 硫酸软骨素 PAMAM
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第一章 绪论11-28
• 1.1 肿瘤的靶向治疗11-12
• 1.2 分子靶向治疗12-16
• 1.2.1 p53 基因药物12-13
• 1.2.2 寡核苷酸药物13-16
• 1.3 microRNA-34a 的概述16-18
• 1.3.1 miR-34a 和肿瘤细胞增殖的关系16-17
• 1.3.2 miR-34a 和肿瘤细胞凋亡的关系17
• 1.3.3 miR-34a 和肿瘤细胞周期17
• 1.3.4 miR-34a 和肿瘤细胞迁移17-18
• 1.3.5 miR-34a 和肿瘤干细胞18
• 1.4 寡核苷酸传递系统面临的困难18-19
• 1.5 纳米靶向递送体系19-24
• 1.5.1 纳米材料19
• 1.5.2 肿瘤的被动靶向19-20
• 1.5.3 纳米载体的主动靶向20-22
• 1.5.4 CD4422-24
• 1.5.5 硫酸软骨素24
• 1.6 PAMAM 纳米材料概述24-26
• 1.7 本文研究内容和创新点26-28
• 第二章 材料和方法28-38
• 2.1 细胞株28
• 2.2 材料28-29
• 2.2.1 核酸序列28
• 2.2.2 主要试剂28-29
• 2.3 实验仪器29
• 2.4 主要试剂的配制29-31
• 2.5 实验方法31-36
• 2.5.1 载体的合成31
• 2.5.2 纳米粒径的测量31
• 2.5.3 凝胶阻滞和核酸保护实验31-32
• 2.5.4 细胞培养32
• 2.5.5 纳米复合物组装32
• 2.5.6 MTT 法检测细胞存活率32-33
• 2.5.7 流式细胞仪检测细胞凋亡33
• 2.5.8 细胞周期的测定33-34
• 2.5.9 Transwells 检测细胞的迁移34
• 2.5.10 划痕实验检测细胞迁移率34
• 2.5.11 蛋白免疫印迹（Western Blot）检测凋亡相关蛋白34-36
• 2.5.12 流式细胞检测细胞的 CD44 表达量36
• 2.5.13 流式细胞仪检测纳米载体的靶向性36
• 2.5.14 纳米载体复合物进入细胞的胞吞机制研究36
• 2.6 激光共聚焦36-37
• 2.7 数据的统计学分析37-38
• 第三章 结果和讨论38-57
• 3.1 PAMAMCS 的合成和粒度电位38-39
• 3.2 纳米复合物组装和核酸保护39-42
• 3.3 纳米载体胞吞机制和靶向性的研究42-47
• 3.4 纳米复合物抑制肿瘤细胞的增殖47-49
• 3.5 纳米复合物对肿瘤细胞的周期阻滞49-51
• 3.6 纳米复合物诱导肿瘤细胞凋亡51-54
• 3.7 纳米复合物影响肿瘤细胞的迁移54-57
• 第四章 结论和展望57-58
• 参考文献58-64
• 致谢64-65
• 附录65-66

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐秀;朱宏;;叶酸靶向PAMAM载药系统在肿瘤治疗中的研究进展[J];材料导报;2012年17期

2 沈楠;朱宏;;药物载体PAMAM树状大分子的毒理[J];材料导报;2012年19期

3 吕燕妮;郑珩;何华;;PAMAM树状大分子与加替沙星相互作用的分子模拟研究[J];药物生物技术;2010年01期

4 邓新荣;刘子华;樊彩云;李凤林;;PAMAM-DTPA的制备、标记及生物分布研究[J];中国原子能科学研究院年报;2011年00期

5 刘彦;李秋容;谢方方;;聚酰胺胺(PAMAM)树状大分子在口腔医学中的研究现状[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2013年06期

6 刘丹;胡海洋;张洁;唐星;陈大为;;pH敏感PAMAM树状大分子复合物胶束的制备及性质研究[J];沈阳药科大学学报;2011年02期

7 孔淑仪;唐国涛;裴元英;姜嫣嫣;;PAMAM-PEG/甲氨蝶呤复合物在正常及荷瘤鼠体内的药动学和抗肿瘤活性[J];药学学报;2009年01期

8 叶玲,江晓舟,杨华,苏健婷,恽榴红;聚酰胺-胺(PAMAM)树状大分子对甲氨蝶呤的包合及缓释研究[J];高等学校化学学报;2005年02期

9 唐静成,叶玲,彭亚光,张亮仁;PAMAM树状大分子的合成及其计算机模拟[J];首都医科大学学报;2005年02期

10 叶W毱

本文编号：770899