长期不同负荷运动对大鼠空间记忆能力及小脑Orexin-A、OX1R表达的影响

发布时间：2017-10-23 05:20

  本文关键词：长期不同负荷运动对大鼠空间记忆能力及小脑Orexin-A、OX1R表达的影响

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【摘要】：目的:通过建立长期不同负荷游泳运动模型,探讨运动对大鼠空间记忆提取能力及小脑Orexin-A、OX1R表达的影响,为揭示长期不同负荷的运动干预对小脑空间记忆提取能力的影响机制提供神经生物学资料。方法:选用2月龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠36只,随机分为3个组:对照组(C组,10只)、中等负荷运动组(M组,13只)、过度负荷运动组(O组,13只)。首先,对各组大鼠进行8天的Morris水迷宫实验(7天定位航行实验+1天空间探索实验);之后C组自然喂养8周,M组中等负荷运动8周,O组大负荷运动8周;然后再对各组大鼠进行1天的空间探索测试,探讨不同负荷的运动对大鼠空间记忆提取能力的影响。在设定时间内取材,然后进行各项生化指标的检测。应用ELISA技术测定血清血睾酮含量;Real-time PCR技术检测大鼠小脑Orexin-A、OX1R的mRNA表达水平;Western blot技术检测大鼠小脑OX1R蛋白的表达水平;免疫荧光技术确定Orexin-A、OX1R在小脑的分布。结果:1、体重监测结果:前两周,各组大鼠的平均体重无组间差异(P0.05);第3-8周,M组与O组平均体重显著性低于C组(P0.01);第5-8周,O组平均体重显著性低于M组(P0.05,P0.01)。2、血睾酮检测结果:M组血睾酮浓度显著低于C组(P0.01),O组血睾酮浓度显著低于C组、M组(P0.01)。3、Morris水迷宫实验结果:定位航行实验中,各组大鼠的平均逃避潜伏期,第2天比第1天显著性缩短(P0.05,P0.01),第3-7天比第2天显著性缩短(P0.05,P0.01),第3-7天之间无显著性差异(P0.05);同一天内,各组大鼠之间的平均逃避潜伏期无显著性差异(P0.05)。空间探索实验中,各组大鼠在运动干预前的穿越原站台次数无组间差异(P0.05);运动干预前、后相比,各组大鼠在运动干预后的穿越原站台次数均显著少于干预前(P0.05,P0.01);而运动干预后穿越原站台次数,M组显著多于C组(P0.05),O组显著少于C组(P0.05)。4、Real-time PCR检测结果:M组小脑Orexin-A mRNA表达量显著性高于C组(P0.05),O组小脑Orexin-A mRNA表达量显著性低于C组(P0.05);M组小脑OX1R mRNA表达量显著低于C组(P0.05),O组小脑OX1R mRNA表达量显著性低于C组(P0.05)。5、Western blot检测结果:M组小脑OX1R蛋白表达量显著性低于C组(P0.05),O组小脑OX1R蛋白表达量与C组无显著性差异(P0.05)。6、免疫荧光检测结果:Orexin-A和OX1R在小脑有广泛的表达,且Orexin-A在小脑Purkinje cells的表达尤其明显。M组小脑Orexin-A蛋白表达显著性低于C组(P0.05),O组小脑Orexin-A蛋白表达与C组无显著性差异(P0.05)。7、各指标相关性分析结果:运动干预后大鼠穿越原站台次数的平均值,与小脑Orexin-A的mRNA表达水平显著性正相关(P0.01),与小脑OX1R的mRNA表达水平显著性负相关(P0.01),与小脑OX1R的蛋白表达水平显著性负相关(P0.05)。结论:1、长期中等负荷运动上调了小脑Orexin-A的mRNA表达,减缓了大鼠空间记忆提取能力衰减的速度,对空间记忆的保持起到积极作用。2、长期过度负荷运动下调了小脑Orexin-A、OX1R的mRNA表达,加快了大鼠空间记忆提取能力衰减的速度,对空间记忆保持的起到消极作用,可能是由于过度负荷运动干扰了小脑Orexin-A与OX1R mRNA的正常翻译,其中的机制有待进一步研究。
【关键词】：不同负荷运动 空间记忆 小脑 Orexin-A OX1R
【学位授予单位】：成都体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：G804.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 1 前言10
• 2 文献综述10-14
• 2.1 运动与记忆10-12
• 2.1.1 适宜运动与记忆的关系11
• 2.1.2 过度运动与记忆的关系11-12
• 2.2 食欲素及其受体12-14
• 2.2.1 食欲素及其受体概述12
• 2.2.2 食欲素及其受体与记忆的关系12-13
• 2.2.3 食欲素及其受体与小脑的关系13
• 2.2.4 食欲素及其受体与运动的关系13-14
• 2.3 小结14
• 3 材料与方法14-25
• 3.1 实验材料14-16
• 3.1.1 主要仪器14-15
• 3.1.2 主要试剂15
• 3.1.3 实验动物及分组15-16
• 3.2 实验方法16-25
• 3.2.1 Morris水迷宫训练和行为学测试16-17
• 3.2.2 运动干预方案17-18
• 3.2.3 动物取材及样本制备18
• 3.2.4 ELISA检测血睾酮水平18-19
• 3.2.5 Real-time PCR检测小脑Orexin-A、OX1R的mRNA表达19-22
• 3.2.6 Western Blot检测小脑Orexin-A、OX1R蛋白表达22-24
• 3.2.7 免疫荧光检测小脑Orexin-A、OX1R表达24-25
• 3.2.8 统计学分析25
• 4 实验结果25-34
• 4.1 体重监测结果25-26
• 4.2 血睾酮水平检测结果26
• 4.3 Morris水迷宫实验结果26-28
• 4.4 Real-time PCR检测小脑Orexin-A、OX1R的mRNA表达结果28-30
• 4.4.1 标准曲线的建立和扩增效率分析28-29
• 4.4.2 反应特异性分析29-30
• 4.4.3 Real-time PCR检测小脑Orexin-A、OX1R的mRNA表达30
• 4.5 Western Blot检测小脑Orexin-A、OX1R蛋白表达结果30-31
• 4.5.1 小脑Orexin-A蛋白检测结果30-31
• 4.5.2 小脑OX1R蛋白检测结果31
• 4.6 免疫荧光检测小脑Orexin-A、OX1R表达结果31-33
• 4.6.1 免疫荧光定位小脑Orexin-A31-33
• 4.6.2 免疫荧光定位小脑OX1R33
• 4.7 各检测指标之间相关性分析结果33-34
• 5 分析与讨论34-37
• 5.1 不同负荷运动对大鼠体重及血睾酮的影响34-35
• 5.2 不同负荷运动对大鼠空间记忆提取能力的影响35-36
• 5.3 不同负荷运动对大鼠小脑Orexin-A、OX1R表达的影响36-37
• 5.4 各检测指标相关性分析37
• 6 结论37-38
• 7 参考文献38-43
• 致谢43

【参考文献】

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本文编号：1081781