PERK通路在一次大负荷运动后骨骼肌内质网应激中的作用

发布时间：2020-07-08 20:17

【摘要】：目的:观察一次大负荷运动对大鼠骨骼肌内质网应激的影响,以及运动后GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4的蛋白表达变化,同时施予特异性抑制剂,观察GRP78和PERK通路蛋白的表达,研究运动对骨骼肌内质网应激的影响,以及PERK通路在其中的作用。方法:选取8周龄雄性SPF级SD大鼠168只,将所有大鼠进行随机分组,分为安静对照组(C组,n=8)、单纯运动组(E组,n=40)、安慰剂组(A组,n=40)、单纯阻断组(Z组,n=40)和运动阻断组(ZE组,n=40)五个大组,其中,单纯运动组、安慰剂组、单纯阻断组和运动阻断组又根据运动或灌胃后0h、12h、24h、48h、72h各分为五个小组,共计21小组,每小组8只。运动组采取的方案为一次性下坡跑,跑台坡度为-16°,时长90min。安慰剂组灌胃给予大鼠溶于生理盐水的浓度为0.5%的DMSO溶液,灌胃后30min开始计时为即刻。阻断剂组和运动阻断组需灌胃给予特异性抑制剂GSK2606414(1.0mg/kg),灌胃后30min开始计时为即刻。配液时,先将定量的该特异性抑制剂溶于对应的终浓度为0.5%的DMSO原溶液,后加生理盐水稀释至目标浓度。在运动或灌胃后对应时相取大鼠比目鱼肌待测。检测GRP78蛋白以及通路相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4的表达,使用Gel-pro软件来进行相应条带灰度值解析,使用spss One Way ANOVA处理数据。结果:1.一次大负荷运动后大鼠骨骼肌中GRP78蛋白显著升高,在运动后0h、12h、24h持续保持在较高水平,各时相与对照组相比均有显著性差异(p0.05);p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白表达均有显著升高(p0.05),在12h、24h持续保持在较高水平;2.施加特异性抑制剂后,GRP78蛋白表达相比于运动组出现显著下调(p0.05);p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白表达也相应下调。结论:1.一次大负荷运动可致内质网应激,并激活PERK通路;2.给予特异性抑制剂后,PERK通路被阻断,内质网应激下降,提示PERK通路是运动导致骨骼肌内质网应激的机制之一。
【学位授予单位】：北京体育大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：G804.2
【图文】：

比目鱼肌,蛋白表达

不同时相蛋白表达的变化不同时相 GRP78 的蛋白表达变化显示，单纯运动组的大鼠在运动后各时相的 GRP7上升的趋势。与对照组（C 组）相比，单纯运动组24h、48h、72h 蛋白表达均明显上升，并均有非中，在运动后 0h、12h、24h，蛋白表达持续在较高动后 48h 和 72hGRP78 蛋白表达有所回落。（见表表 5 运动后不同时相 GRP78 蛋白表达的变化（%C groupE0 E12 E24 E482.275±0.167**2.220±0.121**2.279±0.107**1.971±0<0.05,**:P<0.01;

比目鱼肌,蛋白表达,大负荷运动

PERK通路在一次大负荷运动后骨骼肌内质网应激中的作用后不同时相 p-PERK 的蛋白表达变化果显示，运动后各时相的 p-PERK 蛋白表达，在总体上呈与 C 组相比，单纯运动组在运动后 0h、12h、24h、48h有非常显著性差异（P<0.01），在运动后 0h、12h 蛋白表之后有所回落。（见表 6，图 2）表 6 运动后不同时相 p-PERK 蛋白表达的变化0h 12h 24h 48h 1.689±0.176**1.637±0.225**1.479±0.095**1.410±0.091**1,*:P<0.05,**:P<0.01。

比目鱼肌,蛋白表达,大负荷运动

PERK通路在一次大负荷运动后骨骼肌内质网应激中的作用著性差异（P<0.05）。在运动后即刻蛋白表达达到最高见表 7，图 3）表 7 运动后不同时相 p-eIF2α 蛋白表达的变化0h 12h 24h 48h 1.445±0.271*1.327±0.206*1.370±0.208*1.262±0.219 *:P<0.05,**:P<0.01。

【参考文献】