菲降解不动杆菌AC的筛选及降解特性的研究

发布时间：2020-10-17 01:06

　　 为了筛选出一株高效的菲降解菌株,采取东北白城地区受原油污染的土壤,以菲作为唯一的碳源,利用传统培养的方式进行筛选。通过形态学的方法进行电镜扫描检测出菌落形态为光滑的双球连接成的短杆状,进一步通过16S rRNA测序结果显示为不动杆菌属(Acinetobacter sp.),命名为AC;探索菌株AC的生长(OD_(600))与菌落数(CFU)的形成,以及菌株AC在不同条件下的生长状况,显示菌株AC在30℃、pH 7.0的条件下具有良好的生长状况。研究发现菲在浓度为20 mg·L~(-1)、接种量为0.1的条件下培养7天,菌株AC的降解率达到了80%。结果表明该菌株为高效降解菌株,同时也在生物修复土壤方面具有良好的应用前景。
【部分图文】：

本研究采取受原油污染的土壤，以菲为唯一碳源，加入无机盐液体培养基中进行富集培养，采用传统培养的方式，筛选出一株高效菲降解菌株，命名为AC；图1为菌株的形态鉴定图。图1(a）为菌株AC在LB固体培养基中的菌落形态，图1(b）为菌株AC在光学显微镜下的形态特征，图1(c）为菌株AC电镜下的菌落形态。结果表明该菌落为圆形，表面光滑，经光学显微镜检测该菌株为革兰氏阴性菌，经电镜扫描菌落形态为双球连接成的短杆状。使用基因组DNA做模板进行PCR扩增，加入测序反应体系进行PCR，测序仪得到的结果与Gen Bank数据库中的序列进行比对，如图2所示。菌株AC与Acinetobacter beijerinckii strain CP9的比对率相似性达到了99%，说明该菌株为不动杆菌属，利用邻接法创建菌株的系统发育树，命名为Acinetobacter sp.AC(NCBI登录号为MK908403）。

使用基因组DNA做模板进行PCR扩增，加入测序反应体系进行PCR，测序仪得到的结果与Gen Bank数据库中的序列进行比对，如图2所示。菌株AC与Acinetobacter beijerinckii strain CP9的比对率相似性达到了99%，说明该菌株为不动杆菌属，利用邻接法创建菌株的系统发育树，命名为Acinetobacter sp.AC(NCBI登录号为MK908403）。2.2 菌落总数的检测

挑取单菌落在LB中培养12～16 h，测量其OD600，控制在1.0左右，加入到含有菲的无机盐液体培养基中，在30℃下进行培养。每隔12 h进行测量OD600，同时涂布在含有菲的固体培养基中，稀释不同的浓度。如图3所示，OD600与细菌总数（CFU）相应变化，随着培养时间的增加，菌株AC在48 h达到其对数生长期，在96 h后趋于衰亡期，OD600与CFU的值也逐渐的降低。2.3 菌株降解菲的工艺条件优化及降解能力的检测
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