盐析法联合柱层析法纯化藻蓝蛋白的研究

发布时间：2020-10-23 06:53

　　 本研究采用分段盐析法和柱层析法从巢湖新鲜蓝藻中提取纯化藻蓝蛋白。首先,使用硫酸铵、柠檬酸三铵、柠檬酸钠和硫酸钠对藻蓝蛋白粗提液进行两步分段盐析纯化,并利用紫外-可见分光光度法对藻蓝蛋白溶液进行纯度及回收率分析,以此确定了硫酸铵、柠檬酸三铵、柠檬酸钠和硫酸钠的最佳用量。其结果为:硫酸铵、柠檬酸三铵、柠檬酸钠和硫酸钠在第一和第二盐析过程中的最佳摩尔浓度分别为:硫酸铵(NH_4)_2SO_4为1.0 mol/L和1.7 mol/L;柠檬酸三铵C_6H_(17)N_3O_7为0.7mol/L和1.3 mol/L;柠檬酸钠C_6H_5Na_3O_7为0.5 mol/L和0.9 mol/L;柠檬酸钠C_6H_(17)N_3O7为1.0 mol/L和1.3 mol/表示硫酸钠Na_2SO_4。经过两步分段盐析,发现随着无机盐摩尔浓度的增高,杂质去除量增大到一定程度后会去除藻蓝蛋白,故纯度和收率都先提高再降低。最优结果表明,使用(NH_4)_2SO_4纯化后,藻蓝蛋白纯度达2.0以上,藻蓝蛋白回收率较高。为了进一步提高藻蓝蛋白的纯度,用(NH_4)_2SO_4进行第二次盐析后,利用离子交换色谱法进一步纯化藻蓝蛋白,研究了pH、离子强度、洗脱速度与进样浓度对纯化效果的影响。其最佳条件为:纤维素A-500,洗脱液pH值7.0,样品浓度1-2 mol/L,加样速度2cm/min,洗脱液NaCl浓度0.25mol/L,最终得到纯度在4.0以上的试剂级藻蓝蛋白。
【学位单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：Q51;X524
【文章目录】：
Acknowledgement
ABSTRACT
摘要
Chapter 1 Introduction
    1.1 Background information
        1.1.1 Location of Chaohu Lake
        1.1.2 Overview of Chaohu Lake Basin
        1.1.3 Analysis of eutrophication status of Chaohu Lake
        1.1.4 Current status of cyanobacteria resource utilization in Chaohu Lake
    1.2 Research status of phycobiliprotein purification at home and abroad
        1.2.1 Concepts related to purification of Phycobiliprotein
        1.2.2 Research status of phycobiliprotein purification
Chapter 2 Materials and Methods
    2.1 Materials
        2.1.1 Organism and culture conditions
        2.1.2 Laboratory equipment
        2.1.3 Experiment reagents and materials
    2.2 Methods
        2.2.1 Phycobiliprotein extraction and purification
    2.3 Main analysis methods
Chapter 3 Results and analysis
    3.1 Ammonium sulfate precipitation
        3.1.1 One step salting out
        3.1.2 Two-step salting out
    3.2 Triammonium citrate precipitation
        3.2.1 One-step salting out
        3.2.2 Two-step of salting out
    3.3 Sodium citrate precipitation
        3.3.1 One-step of salting out
        3.3.2 Two-step of salting out
    3.4 Sodium sulfate precipitation
        3.4.1 One-step of salting out
        3.4.2 Two-step of salting out
    3.5 Analysis
Chapter 4 Purification of Phycocyanin by ion Exchange Chromatography
    4.1 Literature review
    4.2 Materials and methods
        4.2.1 Experimental Materials and Instruments
        4.2.2 IEC precipitation methods
    4.3 Selection of Fillers for Ion Exchange Chromatography
    4.4 Results and analysis
        4.4.1 Effect of eluent p H on Purification of phycocyanin by CellufineA-500
        4.4.2 Effect of ionic strength on purification of phycocyanin by columnchromatography
        4.4.3 Effect of elution rate on the purification of phycocyanin by columnchromatography
        4.4.4 Effect of Sample Concentration on Purification of Phycocyanin byColumn Chromatography
    4.5 Response Surface Experiment of Cellufine A-500 ColumnChromatography
Chapter 5 Conclusion And Prospect
    5.1 Conclusion
    5.2 Prospect
References
List of Academic Activities and Achievements during the Degree

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本文编号：2852692