大肠杆菌yfiF基因原核表达系统构建、表达条件优化及蛋白纯化

发布时间：2017-10-14 11:21

  本文关键词：大肠杆菌yfiF基因原核表达系统构建、表达条件优化及蛋白纯化

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【摘要】：[目的]构建大肠杆菌功能未知基因yfi F的原核表达系统,对诱导表达条件进行优化,并纯化表达的可溶性Yfi F融合蛋白。[方法]使用p ET16b表达质粒构建p ET16b-yfi F原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达Yfi F融合蛋白,对IPTG加入时机、终浓度及诱导时间进行优化,并使用镍柱纯化裂菌上清液中的可溶性Yfi F融合蛋白。[结果]构建了p ET16b-yfi F重组质粒,IPTG诱导表达Yfi F融合蛋白,最佳诱导条件为细菌生长至OD600值为1时加入IPTG,终浓度为0.1 mmol/L,诱导9 h。裂菌上清液中的可溶性Yfi F融合蛋白纯化后浓度为209μg/ml。[结论]成功构建了yfi F的原核表达系统,优化了诱导表达条件,可溶性Yfi F融合蛋白得到纯化。
【作者单位】： 内蒙古大学生命科学学院;内蒙古民族大学生命科学学院;
【关键词】： yfiF基因 pETb质粒 原核表达 蛋白纯化
【分类号】：Q78
【正文快照】： 大肠杆菌细胞的拟核有1个DNA分子,长度约为4.7 Mbp,在DNA分子上分布着大约4 400个基因,每个基因的平均长度约为1 000 bp。随着研究的不断深入,很多基因的功能和作用机制已经明确,但是仍然有一些基因的功能和作用机制还不清楚。大肠杆菌yfi F基因是一个功能未知的基因,它所编码

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本文编号：1030779