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加减右归饮对实验兔膝骨性关节炎软骨损伤及Fas、FasL、P53等凋亡基因表达的影响

发布时间:2017-10-21 01:38

  本文关键词:加减右归饮对实验兔膝骨性关节炎软骨损伤及Fas、FasL、P53等凋亡基因表达的影响


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【摘要】:目的:建立一种与人类膝骨关节炎相似的兔膝骨性关节炎模型,并在确定造模成功的基础上,对骨性关节炎模型进行药物干预,观察中药加减右归饮对实验兔膝骨性关节炎模型软骨损伤及Fas、Fas L、P53等凋亡基因表达的影响,进而为加减右归饮的临床应用提供理论支持。方法:实验动物及分组:选用普通日本大耳兔48只随机分成4组,每组12只:正常组、模型组、塞来昔布组、加减右归饮组。造模方法:分别将模型组、塞来昔布组和加减右归饮组实验兔左后膝于伸直位用医用高分子石膏固定4周,建立实验兔膝骨性关节炎动物模型。确定造模成功后第一天即行药物干预,各组实验兔按250g/只/日的饲料量饲养,以确保塞来昔布组和加减右归饮组实验兔每日的给药量。对各组实验兔分别行药物干预6周,其中正常组和模型组不给药,喂标准饲料;塞来昔布组所喂含饲料中按75mg:250g的药食比添加西药塞来昔布;加减右归饮组组所喂饲料按120g:250g的药食比混加减右归饮超细粉末。持续给药六周后以耳缘静脉空气栓塞法将各组实验兔全部处死,并以外科手术方式快速取下各组实验兔左后膝关节面软骨(为降低标本的差异性,所有软骨标本统一取自实验兔左膝关节股骨髁),对各组标本行肉眼大体观察、光镜分析和电镜分析,并以基因表达谱芯片技术对各组标本凋亡相关基因Fas、Fas L和P53的表达量进行检测分析。结果:经过药物干预后,无论在大体观察、光镜分析和电镜分析的结果,还是基因表达谱芯片检测结果,都显示加减右归饮组和塞来昔布组软骨标本均同模型组具有显著差异,但在对加减右归饮组和塞来昔布组进行形态学对比时,二者未表现出明显差异,基因表达谱芯片检测结果提示在中药加减右归饮和西药塞来昔布在抑制软骨细胞凋亡的路径上具有差异性。结论:(1)通过模型组标本与正常组的大体观察评分、光镜观察结果Mankin’s评分的对比,说明关节制动的造模方法成功的复制了兔膝骨关节炎模型;(2)大体观察、光镜观察和电镜观察相结合的方法,既可对各组软骨标本的凋亡进行定性,又通过评分结果的对比对其损伤程度进行了定量观察,弥补了各种观察方法对标本进行单项观察时的不足;(3)通过加减右归饮组同模型组的分别对比,无论是标本的大体观察评分对比,还是光镜观察结果Mankin’s评分对比,或是标本的电镜观察结果对比,均提示加减右归饮对兔膝骨关节炎的软骨退变具有良好的治疗作用;(4)对比加减右归饮组和塞来昔布组的大体观察评分、光镜观察结果Mankin’s评分及电镜观察结果,未发现显著差异,提示中药加减右归饮在治疗骨性关节炎时可以达到和塞来昔布相同的治疗效果;(5)本研究显示Fas、Fas L和P53等凋亡因子同膝关节骨性关节炎的病变水平密切相关,且在本组数据中呈正相关,相关凋亡因子的表达或同OA的发病机制有关,提示通过应用药物抑制相关凋亡因子的表达或对OA的防治有重要作用;(6)西药塞来昔布与中药加减右归饮均对软骨细胞相关促凋亡因子的表达表现出抑制作用,提示这两种药物在OA的治疗过程中具有重要作用,可在此基础上开展进一步的临床或基础研究,以期深入研究其调控机制。(7)在本组数据中,中药加减右归饮和西药塞来昔布在抑制软骨细胞凋亡的路径上具有差异性,或可对其进行深入研究以进一步揭示中药加减右归饮对骨性关节炎的干预机制。
【关键词】:加减右归饮 骨性关节炎 软骨细胞 Fas FasL P53
【学位授予单位】:云南中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R285.5
【目录】:
  • 中文摘要6-8
  • Abstract8-11
  • 缩略语一览表11-12
  • 引言12-14
  • 第一部分 加减右归饮对实验兔骨性关节炎软骨细胞形态的影响14-26
  • 1.实验材料14-15
  • 1.1 实验动物和药物14
  • 1.2 主要设备及耗材14-15
  • 2.实验方法15-17
  • 2.1 实验兔喂养15
  • 2.2 动物分组15
  • 2.3 给药方法15-16
  • 2.4 动物造模16
  • 2.5 造模评价16-17
  • 2.6 取材及标本制备17
  • 3.观察项目及检测方法17-19
  • 3.1 实验兔的一般观察17-18
  • 3.2 标本大体观察18
  • 3.3 形态学检测18-19
  • 4. 统计分析19
  • 5. 结果19-23
  • 5.1 动物一般情况观察结果19-20
  • 5.2 标本大体观察结果20-21
  • 5.3 光镜下组织学观察结果21-22
  • 5.4 透射电镜下组织学观察结果22-23
  • 6. 讨论23-25
  • 6.1 膝骨关节炎模型的建立23-24
  • 6.2 加减右归饮对兔膝骨性关节炎的治疗作用24-25
  • 7. 结论25-26
  • 第二部分 加减右归饮对实验兔膝骨性关节炎相关凋亡因子的影响26-50
  • 1.实验材料26-27
  • 1.1 实验动物和药物26
  • 1.2 主要实验设备及耗材26-27
  • 1.3 主要实验试剂及试剂盒27
  • 2.实验方法27-29
  • 2.1 实验兔喂养27
  • 2.2 动物分组27-28
  • 2.3 给药方法28
  • 2.4 动物造模28
  • 2.5 造模评价28-29
  • 2.6 取材及标本制备29
  • 3. 制作基因表达谱芯片29-38
  • 3.1 总RNA提取和质量检测29-31
  • 3.2 RNA反转录和体外转录31-35
  • 3.3 样品标记和杂交35-38
  • 4.结果38-46
  • 4.1 基因芯片质控标准38-39
  • 4.2 芯片原始信号值与背景信号值39-40
  • 4.3 阳性控制与阴性控制对照40
  • 4.4 基因表达谱芯片检测结果40-46
  • 5. 讨论46-48
  • 5.1 膝骨性关节炎和关节软骨细胞凋亡46-47
  • 5.2 软骨细胞凋亡的相关调控基因47-48
  • 6.结论48-50
  • 参考文献50-54
  • 综述54-61
  • 参考文献58-61
  • 附录61-66
  • 1.动物饲养环境及造模照片61
  • 2.动物造模后取材61-62
  • 3.关节软骨标本的大体观察62
  • 4. HE染色后软骨细胞形态学观察62-63
  • 5.电镜检测结果63-66
  • 致谢66-67


本文编号:1070565

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