微RNA-223下调心脏特异性新激酶基因表达对心肌细胞肥大的抑制效应

发布时间：2017-11-02 19:25

  本文关键词：微RNA-223下调心脏特异性新激酶基因表达对心肌细胞肥大的抑制效应

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【摘要】：目的探讨微RNA-223(miRNA-223)通过下调心脏特异性新激酶(TNNI3K)基因表达对心肌细胞肥大的调控作用。方法选取原代培养新生大鼠心肌细胞,以内皮素-1(ET-1)人工诱导心肌细胞肥大。应用实时定量PCR测定miRNA-223的表达水平。通过化学修饰RNA模拟物转染实现miRNA-223的过表达,通过重组腺病毒转染实现TNNI3K的过表达。采用抗α-辅肌动蛋白(α-actinin)荧光染色法测量细胞大小,实时定量PCR检测心肌细胞肥大标志性基因的表达,Western印迹法测定TNNI3K和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的蛋白表达,荧光素酶检测法判定miRNA-223与TNNI3K的3’端非编码区(3’-UTR)接合。结果 ET-1诱导的肥大心肌细胞的miRNA-223表达量显著低于正常心肌细胞(P0.01),下调约40%。外源性miRNA-223干预后能显著缩小ET-1诱导的肥大心肌细胞的表面积(P0.01)。miRNA-223模拟物转染组心肌细胞中经典的肥大标志性基因心房钠尿肽(ANP)、α-actinin、Myh6、Myh7的相对表达水平均显著低于空白心肌细胞组(P值分别0.01、0.05)。荧光素活性检测实验显示,miRNA-223模拟物与TNNI3K的3’-UTR核心序列重组体共反应组的相对荧光表达显著低于内对照载体组(P0.01),减少约60%,表明miRNA-223与TNNI3K的3’-UTR核心区可直接接合。miRNA-223组心肌细胞中的TNNI3K蛋白相对表达量显著低于空白心肌细胞组和错义miRNA(scr-miRNA)转染组(P值均0.01),减少约90%。Western印迹法结果显示,miRNA-223模拟物转染组心肌细胞的磷酸化cTnI蛋白表达量显著低于空白心肌细胞组和scr-miRNA转染组(P值均0.01),减少约40%;空白心肌细胞组、scr-miRNA转染组和miRNA-223模拟物转染组间cTnI蛋白表达量的差异无统计学意义(P值均0.05)。结论 miRNA-223通过直接下调TNNI3K基因表达抑制心肌细胞肥大,此调控效应与cTnI的磷酸化受限有关。
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属新华医院心内科;上海健康医学院医学技术系;
【关键词】： 微RNA- 心脏特异性新激酶 心肌细胞 细胞肥大
【基金】：上海市卫生和计划生育委员会青年科研项目(2013Y068) 上海交通大学医学院附属新华医院科研启动基金(13YJ16) 国家自然科学基金青年科学基金项目(81500188)资助
【分类号】：R54
【正文快照】： 心肌肥厚在细胞层面表现为心肌细胞体积增大,该病理过程受到复杂的分子生物学机制调控[1]。明确心肌细胞肥大的信号转导通路,探明可能的分子治疗靶位对心肌肥厚治疗手段的开发至关重要。微RNA(miRNA)是约22个核苷酸长度的小片段RNA,可结合至靶基因信使RNA的3’端非编码区(3’-

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本文编号：1132844