高表达Sptlc2基因促油酸诱导的HSC-T6细胞凋亡及自噬

发布时间：2017-11-05 00:00

  本文关键词：高表达Sptlc2基因促油酸诱导的HSC-T6细胞凋亡及自噬

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【摘要】：目的:本实验拟从丝氨酸棕榈酰转移酶长链亚基2(serine palmitoy ltransferase long chain base subunit 2,Sptlc2)基因这一切入点,明确神经酰胺从头合成途径关键酶Sptlc2对HSC-T6细胞凋亡及自噬的影响,证实干预HSC-T6细胞凋亡及自噬的新靶点。方法:1.体外培养SD大鼠HSC-T6细胞株,进行分组:HSC-T6细胞组(正常对照组)、油酸诱导的HSC-T6细胞组(油酸组)、油酸诱导的pcDNA3.1(+)-NC组(空载体组)、油酸诱导的pcDNA3.1(+)-Sptlc2组(Sptlc2转染组),除正常对照组外,其余各组均采用100umol/l油酸共培养HSC-T6细胞。2.转染48小时后,应用q PCR技术检测各组HSC-T6细胞内Sptlc2 mRNA表达情况。3.流式细胞仪检测各组HSC-T6细胞凋亡情况。4.MDC染色法荧光显微镜下观察各组HSC-T6细胞内自噬体数量。5.Western blot技术检测各组HSC-T6细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,自噬标志蛋白LC3B,自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1的蛋白表达情况。结果:1.各组HSC-T6细胞内Sptlc2 mRNA表达情况:油酸组与正常对照组比较,Sptlc2 mRNA表达明显增加,差异具有显著统计学意义P0.01)。Sptlc2转染组与油酸组、空载体组比较,Sptlc2 mRNA表达明显增加,差异具有显著统计学意义(P0.01)。2.各组hsc-t6细胞凋亡情况:油酸组与正常对照组比较,总凋亡率明显升高,差异具有显著统计学意义(p0.01)。sptlc2转染组与油酸组、空载体组比较,总凋亡率明显升高,差异具有显著统计学意义(p0.01)。3.各组hsc-t6细胞内自噬体数量:经mdc染色后,应用荧光显微镜观察显示:油酸组与正常对照组比较,自噬体数量明显增多。sptlc2转染组与油酸组、空载体组比较,自噬体数量明显增多。4.各组hsc-t6细胞内凋亡相关蛋白bax、bcl-2的蛋白表达情况:油酸组与正常对照组比较,凋亡相关蛋白bax表达明显增加,凋亡相关蛋白bcl-2表达明显减少,bax/bcl-2比值明显变大,差异具有显著统计学意义(p0.01);sptlc2转染组与油酸组、空载体组比较,凋亡相关蛋白bax表达明显增加,凋亡相关蛋白bcl-2表达明显减少,bax/bcl-2比值明显变大,差异具有显著统计学意义(p0.01);5.各组hsc-t6细胞内自噬标志蛋白lc3b,自噬相关蛋白atg5、beclin-1的蛋白表达情况:油酸组与正常对照组比较,自噬标志蛋白lc3b-ii表达明显增加,自噬标志蛋白lc3b-i表达明显减少,lc3b-ii/lc3b-i比值明显变大,差异具有显著统计学意义(p0.01);自噬相关蛋白beclin-1表达明显增加,差异具有显著统计学意义(p0.01);自噬相关蛋白atg5表达增加,差异具有统计学意义(p0.05)。sptlc2转染组与油酸组、空载体组比较,自噬标志蛋白lc3b-ii表达明显增加,自噬标志蛋白lc3b-i表达明显减少,lc3b-ii/lc3b-i比值明显变大,差异具有显著统计学意(p0.01);自噬相关蛋白Beclin-1表达明显增加,差异具有显著统计学意义(P0.01);自噬相关蛋白Atg5表达增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.油酸可以诱导HSC-T6细胞凋亡及自噬。2.上调神经酰胺从头合成途径关键酶Sptlc2可以促进油酸诱导的HSC-T6细胞凋亡及自噬。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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1 周彬;黄巧冰;;血管内皮细胞自噬在疾病发生发展中的作用[J];广东医学;2013年19期

2 石丰榕;汪森明;;神经酰胺代谢在细胞凋亡与自噬中的作用[J];广东医学;2012年20期

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本文编号：1141674