肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

发布时间：2017-11-15 02:04

  本文关键词：肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

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【摘要】：【目的】以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象,构建基因缺失株及表达纯化该蛋白,为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础。【方法】参考Gen Bank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物,运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除,构建C50041ΔslyD缺失株;原核表达SlyD蛋白,通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定;利用生物信息学相关软件,分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域。【结果】PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株,其生长特性与野生株基本一致;SDS-PAGE及PPIase活性分析表明,获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白;生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成。【结论】成功获得了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白。
【作者单位】： 扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【基金】：国家自然科学基金重点国际合作项目(31320103907) 国家公益性行业(农业)科研专项(201403054) 江苏省优势学科经费资助 江苏省研究生培养创新工程项目(KYLX15_1384)~~
【分类号】：R378.22
【正文快照】： 肠炎沙门菌(Salmonella enterica serovar enteritidis)是一种重要的人兽共患病原菌,在世界范围内广泛流行。食用被污染的禽肉制品及蛋制品是人类感染肠炎沙门菌的主要来源,一般导致胃肠道局部疾病,引发呕吐和腹泻等症状[1]。肠炎沙门菌的致病机理及防控措施愈来愈受到人们关

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本文编号：1187896