胭脂鱼IgM重链基因克隆与表达分析

发布时间：2017-12-14 13:34

  本文关键词：胭脂鱼IgM重链基因克隆与表达分析

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【摘要】：目的认识胭脂鱼IgM的结构与功能,研究其免疫应答规律。方法通过同源克隆和RACE技术构建胭脂鱼IgMμcDNA全长,重组表达恒定区序列并制备抗血清,分别从mRNA水平和蛋白水平检测胭脂鱼IgM各组织及发育早期的表达情况;利用抗血清探究经灭活嗜水气单胞菌免疫后胭脂鱼IgM免疫应答规律。结果获得胭脂鱼IgμcDNA全序列,长2028 bp,编码580 aa,重组表达IgMμCH_(1-4)区,获得相对分子质量约45 000的重组蛋白,成功制备rIgM多抗,免疫印迹分析可见,anti-rIgM抗血清能够特异性识别rIgM和胭脂鱼血清IgM;各组织RT-PCR结果表明,被检测组织除肌肉、皮肤和心脏外均有IgM表达;发育各时期RT-PCR结果显示,胭脂鱼卵中含有IgM转录本,出膜第30天可明显检测到IgM表达。Western blot检测结果表明,免疫相关组织IgM含量均较高,心脏、皮肤未检测到IgM转录本,却含有大量的IgM蛋白,脑和肌肉始终未检测到IgM蛋白。灭活嗜水气单胞菌免疫实验表明,胭脂鱼在初次免疫第21天菌特异性IgM滴度有明显变化,加强免疫后迅速升高,并在最高滴度维持2个月后缓慢降低。结论成功获得濒危物种胭脂鱼IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗体,为胭脂鱼免疫球蛋白结构分析、免疫监测及抗原诊断提供有力工具。
【作者单位】： 西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室;
【基金】：西南大学基本科研业务费专项基金(XDJK2012C082) 公益性行业(农业)科研专项(201203086)
【分类号】：S917.4;Q78
【正文快照】： 胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)隶属于鲤形目(Cypriniformes)胭脂鱼科(Catostomidae),该鱼体型别致、色彩绚丽、游动文静,被誉为“亚洲美人鱼”,分布仅见于我国的长江和闽江,具有极高的观赏价值和重要的科学价值[1-4]。自然状态下,胭脂鱼的胚胎发育期长,繁殖率低[2],加之近年

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本文编号：1288122