中华蜜蜂乙酰胆碱酯酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达鉴定

发布时间：2018-01-06 23:08

  本文关键词：中华蜜蜂乙酰胆碱酯酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达鉴定　出处：《食品与生物技术学报》2016年12期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：有机磷污染是食品安全的重大隐患,乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase,ACh E)可用于有机磷农药残留的检测。中华蜜蜂是我国独有的蜜蜂当家品种,蜜蜂对农药的敏感性很高,中华蜜蜂来源的乙酰胆碱酯酶基因尚未被克隆并应用于食品安全监测。以中华蜜蜂头部组织总RNA为模板,经RACE方法获得了ACh E基因c DNA全序列,全长约1.8 kb。构建重组表达载体p PIC3.5K-ACh E,将目的基因表达盒整合入毕赤酵母GS115的基因组中获得重组菌株,0.5%甲醇诱导重组菌株表达ACh E蛋白,经SDS-PAGE、酶活性分析表明,中华蜜蜂ACh E基因首次克隆成功并首次在毕赤酵母中获得成功表达,筛选出一株酶活性较高的菌株,纯化的重组乙酰胆碱酯酶其活性为10 568 U/mg,可以用于有机磷农药残留的检测。
[Abstract]:Organophosphorus contamination is an important hidden danger of food safety. Acetylcholinesterase (ache) is Acetyl cholinesterase. ACh E) can be used for the detection of organophosphorus pesticide residues. Honeybee is a unique honeybee species in China, which is highly sensitive to pesticides. The acetylcholinesterase gene from Chinese honeybee has not been cloned and applied to food safety monitoring. The total RNA of the head tissue of honeybee bee was used as a template. The whole sequence of c DNA of ACh E gene was obtained by RACE method. The total length of c DNA was about 1.8 kb.Recombinant expression vector p PIC3.5K-ACh E was constructed. The target gene expression cassette was integrated into the genome of Pichia pastoris GS115. The recombinant strain was induced by 0.5% methanol to express ACh E protein by SDS-PAGE. Enzyme activity analysis showed that ACh E gene was cloned successfully and successfully expressed in Pichia pastoris for the first time. A strain with high enzyme activity was screened out. The purified recombinant acetylcholinesterase has an activity of 10 568 U / mg and can be used for the detection of organophosphorus pesticide residues.
【作者单位】： 郑州大学生命科学学院;粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江南大学;河南天茂生物有限公司;
【基金】：中央高校基本科研业务费专项资金项目(JUSRP51401A)
【分类号】：Q78
【正文快照】： 近年来,随着经济的发展,人们生活水平逐渐ACh E的文献与专利的报道。当前虽已开展了多种提高,越来越多的消费者对食品的安全、营养等方生物来源的乙酰胆碱酯酶的研究[10-13],但其在农药面的要求的不断提高。重视食品安全,已经成为衡残留检测方面的应用并不是最优的,有必要研究

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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