Quick testing-technology of transgenic rice with npt-Ⅱ scree

  本文关键词：带npt-Ⅱ基因转基因水稻快速检测技术的建立，由笔耕文化传播整理发布。

带npt-Ⅱ基因转基因水稻快速检测技术的建立 Quick testing-technology of transgenic rice with npt-Ⅱ screen marker gene

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摘要：

以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系.使用不同浓度的卡那霉素(Kanamycin,Kan)和G418溶液将ZH9(R)和ZH9(CK)成株离体叶片于室内室温下置于培养皿中浸泡处理,通过观察叶片变化,确定G418为检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的最佳抗生素,将G418(溶液)80mg/L浓度(处理4天)作为检测该类转基因水稻成株离体叶片的临界浓度.进一步用G418对ZH9(R)和ZH9(CK)种子、幼胚和幼苗进行了不同处理.确定:(1)G418(溶液)300 mg/L浓度(处理7天)作为检测该类转基因水稻种子的临界浓度;(2)G418(1/2MS+0.5 mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)200 mg/L浓度(处理10天)作为检测该类转基因水稻幼胚的临界浓度;(3)G418(1/2 MS+0.5 mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)150 mg/L浓度(处理12天)作为检测该类转基因水稻幼苗的临界浓度,并且通过PCR方法证实了上述结论.将这些结论应用于ZH9(R)转育后代叶片、种子、幼胚和幼苗群体的检测,检测效果都非常明显.这为带npt-Ⅱ基因转基因水稻建立了一套简便、直观且准确的检测方法.

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