RNA干扰INHα基因对绵羊颗粒细胞周期及凋亡相关基因表达的影响

发布时间：2018-01-24 23:33

  本文关键词： INHα基因 siRNA 绵羊 颗粒细胞　出处：《畜牧兽医学报》2017年08期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：旨在研究RNA干扰INHα基因对绵羊颗粒细胞周期及凋亡相关基因表达的影响,明确抑制素对绵羊颗粒细胞的局部调节作用,为今后提高动物的繁殖力奠定基础。选用1.0~1.5岁的小尾寒羊,从卵泡(3~7mm)中分离培养颗粒细胞,将siINHα和siNC(阴性对照)转染颗粒细胞,以未转染的细胞为空白对照(Control),利用脂质体介导法进行转染,荧光定量RT-PCR检测INHα基因的沉默效率、细胞周期和凋亡相关基因的变化,流式细胞仪检测细胞周期的分布变化。结果表明,siRNA转染绵羊颗粒细胞48h后,INHα基因的沉默效率达85%以上。与阴性对照相比,细胞周期相关基因Cyclin D1和CyclinB1mRNA的表达水平分别降低了0.2倍和0.7倍(P0.05),而p21的mRNA表达水平升高了0.9倍(P0.05);细胞凋亡通路中的促凋亡因子Bax、p53和Caspase3的mRNA表达量分别升高了1.8倍、3.6倍和0.4倍(P0.05),而抗凋亡因子Bcl-2mRNA表达量不受影响,阴性对照与空白对照差异不显著(P0.05)。与阴性对照相比,细胞周期的分布显著改变,干扰组G1细胞比例显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05),而阴性对照与空白对照间无显著差异(P0.05)。综上表明,INHα作为绵羊颗粒细胞中关键的调控因子,通过调控绵羊颗粒细胞的生长和凋亡参与调控绵羊卵泡排卵的过程。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the effect of RNA interference on the expression of apoptosis-related genes and cell cycle in sheep granulosa cells, and to clarify the local regulation of inhibin on sheep granulosa cells. In order to improve the fecundity of animals in the future, small tail Han sheep (1.0 ~ 1.5 years old) were used to isolate and culture granulosa cells from follicular follicles (3 ~ 7 mm). SiINH 伪 and siNC- (negative control) were transfected into granulosa cells, and the untransfected cells were used as blank control. The transfection was carried out by liposome mediated method. Fluorescence quantitative RT-PCR was used to detect the silencing efficiency, cell cycle and apoptosis-related genes of INH 伪 gene. Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. After transfection of siRNA into sheep granulosa cells for 48 h, the silencing efficiency of siRNA 伪 gene was more than 85%, which was higher than that of negative control group. The expression of cell cycle related gene Cyclin D1 and CyclinB1mRNA decreased 0.2-fold and 0.7-fold P0.05, respectively. The mRNA expression level of p21 was 0.9-fold higher than that of P0.05; The expression of apoptosis-promoting factor Baxon p53 and Caspase3 in apoptotic pathway increased by 1.8-fold, 3.6-fold and 0.4 times respectively (P0.05). However, the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2mRNA was not affected, and the difference between negative control and blank control was not significant (P 0.05). Compared with negative control, the distribution of cell cycle was significantly changed. The proportion of G1 cells in the interference group was significantly higher than that in the control group, and the proportion of P0.05 cells in the S phase decreased significantly, but there was no significant difference between the negative control group and the blank control group. As a key regulatory factor in sheep granulosa cells, INH 伪 participates in the regulation of ovulation by regulating the growth and apoptosis of sheep granulosa cells.
【作者单位】： 河北农业大学动物科技学院;
【基金】：国家现代肉羊产业技术体系项目(CARS-39) 河北省研究生创新资助项目(1099009)
【分类号】：S826.2
【正文快照】： 卵泡发育受到卵巢内生长因子、垂体促性腺激素和类固醇激素协同作用,其过程主要表现为卵泡的生长和闭锁。在参与卵巢卵泡生长和闭锁的众多因子中,抑制素起重要作用[1-3]。抑制素(Inhibin,INH)主要由卵巢颗粒细胞分泌,是α、β亚基通过二硫键构成的糖蛋白质激素,通过反馈抑制垂

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