小鼠FAM134B基因慢病毒表达载体的构建

发布时间：2018-03-11 17:04

  本文选题：FAMB基因　切入点：超表达　出处：《黑龙江畜牧兽医》2017年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为了应用基因重组技术,构建小鼠FAM134B基因慢病毒超表达和短发夹(shRNA)载体,试验根据Gen Bank上登录的小鼠FAM134B基因序列设计引物,扩增该基因开放阅读框(ORF)序列,并克隆到酶切的FUGW载体,同时设计3对FAM134B-siRNA序列克隆到酶切的PsicoR载体,将获得的重组质粒与包装质粒(PSPA和PMD2G)共转染293T细胞包装成病毒颗粒,感染体外培养的3T3-L1前体脂肪细胞,实时荧光定量PCR(q PCR)检测FAM134B基因的超表达及干扰效果。结果表明:重组质粒FUGW-PGC-1α-GFP及PsicoR-FAM134B-GFP测序验证成功,包装后感染3T3-L1前体脂肪细胞发现该基因被成功超表达和干扰。说明成功构建小鼠FAM134B慢病毒超表达和干扰载体,可为该基因在脂代谢中的作用提供重要的工具。
[Abstract]:In order to construct mouse FAM134B gene lentivirus overexpression vector and short hairpin shRNA vector by gene recombination technique, primers were designed according to the mouse FAM134B gene sequence registered on Gen Bank to amplify the open reading frame (ORF) sequence. At the same time, three pairs of FAM134B-siRNA sequences were designed to be cloned into the PsicoR vector. The recombinant plasmid was co-transfected into 293T cells into viral particles and infected with 3T3-L1 precursor adipocytes in vitro. Real-time fluorescence quantitative PCR(q PCR was used to detect the overexpression and interference of FAM134B gene. The results showed that the recombinant plasmid FUGW-PGC-1 伪 -GFP and PsicoR-FAM134B-GFP were sequenced successfully. It was found that the gene was successfully overexpressed and interfered in the preadipocytes infected with 3T3-L1 after packaging, indicating that the successful construction of mouse FAM134B lentivirus superexpression and interference vector could provide an important tool for the role of the gene in lipid metabolism.
【作者单位】： 西南民族大学生命科学与技术学院;新乡医学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31201990) 四川省应用基础项目(2014JY0080)
【分类号】：Q78

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本文编号：1599089