牦牛SND1基因特征序列分析及IGF-I、EGF、FGF对其在乳腺上皮细胞表达的影响

发布时间：2018-03-24 20:51

  本文选题：牦牛　切入点：乳腺上皮细胞　出处：《甘肃农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：SND1(Staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1)是一种参与基因调控的转录共激活因子蛋白。本研究旨在首先得到SND1基因序列,然后分析其生物学特性,并探讨不同浓度IGF-I、EGF、FGF对其在乳腺上皮细胞表达的影响。采集泌乳期牦牛乳腺组织,用组织块贴壁法和胰蛋白酶消化法获得乳腺上皮细胞,经鉴定后,扩增SND1基因,测序并拼接。用相关生物信息软件分析牦牛SND1基因特性,用免疫组织化学和免疫荧光技术对牦牛SND1基因编码蛋白进行定位分析。向纯化的3代乳腺上皮细胞中分别加入0、50、100、200 ng/m L的IGF-I和EGF,0、25、50、100、200 ng/m L FGF,通过实时荧光定量PCR和免疫荧光检测其对SND1基因和蛋白表达的影响。研究结果显示:(1)体外培养的细胞表达角蛋白18、β-酪蛋白,经鉴定为乳腺上皮细胞。(2)牦牛SND1基因全序列为3294 bp,含有2733 bp的ORF(GenBank登录号:KU884327),共包含20种氨基酸;牦牛SND1基因序列与野牛、家牛、藏羚羊、山羊、猪、野骆驼、马、黑猩猩、人、褐鼠的同源性分别为99%、98%、96%、94%、91%、90%、90%、89%、89%、85%;系统进化树表明与野牛和家牛的进化水平较近,与人和鼠的进化水平较远;SND1基因编码蛋白为非分泌蛋白,非跨膜蛋白;(3)SND1蛋白在分泌上皮细胞(乳腺上皮细胞)和导管上皮细胞呈阳性高表达,在肌上皮细胞呈弱表达,在乳腺上皮细胞胞核高表达,胞质弱表达。(4)IGF-I、EGF、FGF均可提高牦牛乳腺上皮细胞SND1基因和蛋白的表达。200 ng/m L IGF-I实验组,SND1基因和蛋白表达量最高,显著高于其他浓度组(P0.05);EGF和FGF浓度均为100 ng/m L时,SND1基因和蛋白表达量最高,显著高于其他浓度组(P0.05)。从本研究得到了包含完整ORF的SND1基因序列,该序列高度保守,同时也存在种属特异性。IGF-I、EGF和FGF生长因子均可在体外调控牦牛乳腺上皮细胞中SND1蛋白的表达,在一定程度上参与SND1生物学功能调控,IGF-I组呈浓度依赖性,EGF和FGF组均有最佳浓度。上述研究结果为进一步探究SND1对牦牛泌乳机能的调节提供了相关依据,也为通过加入外源因子调控泌乳提供可能。
[Abstract]:SND1 (Staphylococcal nuclease and Tudor domain containing 1) is a gene involved in the regulation of the transcriptional coactivator protein. The purpose of this study is to first get the SND1 gene sequence and analysis of its biological characteristics, and to explore the effects of different concentrations of IGF-I, EGF, FGF on its expression in mammary epithelial cells of lactating yak. Collection of breast tissue. Got mammary epithelial cells by tissue adherent and trypsin digestion method, after identification, SND1 gene amplification, sequencing and splicing. Analysis of yak SND1 gene with characteristics of biological information software, positioning analysis of yak SND1 gene encoding protein by immunohistochemistry and immunofluorescence technique. The purified mammary epithelial cells to the 3 generation the 0,50100200 ng/m L were added to IGF-I and EGF, 0,25,50100200 ng/m L FGF by real-time fluorescence quantitative PCR and immunofluorescence detection of SND1 gene and egg 鐧借〃杈剧殑褰卞搷.鐮旂┒缁撴灉鏄剧ず:(1)浣撳�栧煿鍏荤殑缁嗚優琛ㄨ揪瑙掕泲鐧�18,尾-閰�铔嬬櫍�

本文编号：1659978