沉默DNAJB11基因对肝癌SMMC7721细胞增殖、周期与凋亡的影响

发布时间：2018-03-28 14:11

  本文选题：癌　切入点：肝细胞　出处：《肿瘤》2017年05期

【摘要】：目的:研究沉默DNAJ同源B亚家族成员11(DNAJ homolog subfamily B member 11,DNAJB 11)基因表达对人肝细胞癌SMMC7721细胞增殖、周期与凋亡的影响。方法:构建携带有针对DNAJB 11基因的DNAJB11-shRNA重组慢病毒载体pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA,并制备重组慢病毒。将具有高效感染力的重组病毒感染SMMC7721细胞。CCK-8法检测被感染后SMMC7721细胞的增殖情况;分别采用实时荧光定量PCR法与蛋白质印迹法检测被感染后,SMMC7721细胞中DNAJB11、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和促凋亡基因caspase-3 mRNA及其蛋白的表达;FCM法检测沉默DNAJB 11基因表达后对SMMC7721细胞的周期和凋亡的影响。结果:成功构建插入DNAJB11-shRNA的重组慢病毒载体pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA。CCK-8法检测结果显示,感染携带有DNAJB11-shRNA重组慢病毒后,SMMC7721细胞的增殖被抑制(P0.05);实时荧光定量PCR法与蛋白质印迹法检测结果证实,DNAJB11-shRNA能有效沉默SMMC7721细胞中DNAJB11 mRNA及其蛋白的表达(P值均0.05);DNAJB 11基因沉默后,能明显上调caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平,并下调PCNA mRNA及蛋白的表达水平(P值均0.05)。FCM检测结果表明,沉默DNAJB 11基因的表达可将SMMC7721细胞阻滞于细胞周期的G1期,并能促进其凋亡,差异均有统计学意义(P值均0.01)。结论:沉默DNAJB 11基因表达可抑制SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡,这可能与下调SMMC7721细胞中增殖相关蛋白PCNA的表达,上调凋亡相关蛋白caspase-3的表达有关。
[Abstract]:Aim: to study the effect of silencing 11(DNAJ homolog subfamily B member 11DNA JB11) gene expression on the proliferation of human hepatocellular carcinoma SMMC7721 cells by silencing 11(DNAJ homolog subfamily B member 11DNA JB11, a member of the homologous B subfamily of DNAJ. Methods: the recombinant lentivirus vector pCDH-PurorDNA JB11-shRNAs carrying DNAJB 11 gene was constructed, and the recombinant lentivirus was prepared. The highly infectious recombinant virus was infected with SMMC7721 cells. CCK-8 method was used to detect the proliferation of infected SMMC7721 cells. The expression of cell JB11, proliferating cell nuclear antigen-PCNA and caspase-3 mRNA and their proteins in infected SMMC7721 cells were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot respectively. Effect of SMMC7721 cell cycle and apoptosis. Results: the recombinant lentivirus vector inserted into DNAJB11-shRNA was successfully constructed by pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA.CCK-8 assay. After infection with DNAJB11-shRNA recombinant lentivirus, the proliferation of SMMC7721 cells was inhibited by P0.05.The results of real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting showed that SMMC7721 JB11-shRNA could effectively silence the expression of DNAJB11 mRNA and its protein in SMMC7721 cells after the silencing of DNAJB11 mRNA and DNAJB11 JB11 gene. The expression level of caspase-3 mRNA and protein was up-regulated, and the expression level of PCNA mRNA and protein was down-regulated by 0.05).FCM. The results showed that silencing the expression of DNAJB 11 gene could block SMMC7721 cells from G1 phase of cell cycle and promote its apoptosis. Conclusion: silencing the expression of DNAJB 11 gene can inhibit the proliferation of SMMC7721 cells and promote its apoptosis, which may be related to down-regulating the expression of proliferation-associated protein PCNA and up-regulating the expression of apoptosis-related protein caspase-3 in SMMC7721 cells.
【作者单位】： 重庆市肿瘤研究所血液肿瘤生物治疗科;重庆市肿瘤研究所肝胆外科;
【基金】：重庆市应用开发计划资助项目(编号:cstc2014yykfA110031) 中国医师协会研究项目(编号:ZGYSXH20120701)~~
【分类号】：R735.7

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1676657