牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化

发布时间：2018-04-17 10:21

  本文选题：奶牛 + NF-κB　； 参考：《东北农业大学学报》2016年09期

【摘要】：NF-κB1是一类重要核转录因子,参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合,发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列,通过Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体中,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-NF-κB1,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经酶切和测序鉴定正确后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,8 mol·L~(-1)尿素裂解包涵体,裂解后上清经GST-Sepharose 4B亲和纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-NF-κB1构建成功,SDS-PAGE证实NF-κB1融合蛋白存在于包涵体内,纯化后得到GST-NF-κB1融合蛋白,为进一步研究NF-κB1蛋白在奶牛泌乳中作用提供试验依据。
[Abstract]:NF- 魏 B1 is an important nuclear transcription factor. NF- 魏 B1 is involved in the regulation of gene expression. NF- 魏 B1 can bind to the genes related to the regulation of milk synthesis in milk of dairy cows and play a role in the regulation of lactation.The coding sequence of NF- 魏 B1 gene in dairy cattle was amplified by PCR method. The recombinant plasmid pGEX-4T-1-NF- 魏 B1 was constructed by inserting Eco R 鈪，

本文编号：1763190