KLF3基因3′-UTR区双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建与活性鉴定

发布时间：2018-04-28 18:24

  本文选题：KLF基因 + 双荧光素酶基因报告载体　； 参考：《中国畜牧兽医》2017年03期

【摘要】：试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与KLF3基因3′-UTR相互作用的miRNA;使用脂质体2000转染试剂将miRNAs mimics与构建好的KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶报告载体或突变载体共转染于常规培养的293T细胞中,检测荧光素酶活性。结果表明,KLF3基因3′-UTR可能是miR-21的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-21 mimics组(0.6900±0.0144)比突变组(1.000±0.0688)和空白对照组(1.000±0.0159)KLF3基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体和突变载体的活性降低了31%(P0.01)。本试验成功构建了含有KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶基因报告载体与突变载体,初步证实miR-21对KLF3基因有调控作用。
[Abstract]:The aim of this study was to construct a double luciferase gene reporter vector and its mutant vector in the 3'-UTR region of zinc finger protein 3s KLF3 gene, and to analyze the miRNAs that might regulate the expression of KLF3 gene. Firstly, the 3'-UTR sequence of KLF3 gene was amplified by PCR and cloned into the double luciferase report vector digested by Xho 鈪，

本文编号：1816371