单增李斯特菌新疆分离株lmo0160基因克隆及序列分析

发布时间：2018-04-28 21:00

  本文选题：单增李斯特菌 + lmo基因　； 参考：《微生物学通报》2017年12期

【摘要】：【目的】单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,常引起人和动物致病。其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在单增李斯特菌致病过程中发挥重要作用,根据参考株全序列预测的41个LPXTG基序蛋白中仍有部分蛋白功能未知。对单增李斯特菌新疆绵羊脑分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白Lmo0160的基因进行克隆及生物信息学分析,为功能验证提供基础。【方法】根据GenBank中收录的lmo0160序列设计特异性引物,利用PCR方法对新疆分离株的lmo0160基因进行扩增,将扩增产物克隆到pMD 19-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定,并对基因核苷酸序列和蛋白序列进行分析。【结果】分离株LM90SB2的lmo0160序列全长为1 708 bp,包含1 428 bp的开放阅读框,共编码475个氨基酸;LM90SB2株lmo0160核苷酸序列与CFSAN008100株(4b型,美国)、CFSAN023463株(4b型,美国)、J2-064株(4b型,美国)、F2365株(4b型,奶酪,美国)和NTSN株(4b型,绵羊脑,中国扬州)相似性为99.0%-99.1%;与M7株(4a型,牛奶,中国浙江)相似性为97.2%,与Finland1998株(1/2a型,美国)、N53-1株(1/2a型,熟火腿,瑞士)、N1546株(1/2a型,鱼,丹麦)和EGD-e株(1/2a型,美国)相似性为87.2%-91.1%;其推导的氨基酸序列与上述菌株相似性为91.8%-99.4%。系统进化树显示,LM90SB2菌株的lmo0160基因与CFSAN023463、F2365和NSTN菌株亲缘关系较近,处于同一分支上,而与标准株EGD-e菌株亲缘关系较远。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2的Lmo0160蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。蛋白结构域预测表明Lmo0160蛋白含有胶原蛋白结合域和Cna B结构域。【结论】克隆了LM90SB2的lmo0160基因,为进一步研究LM90SB2的lmo0160基因功能奠定了基础。
[Abstract]:Objective: Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen, which often causes human and animal diseases. The cell wall surface LPXTG motifs play an important role in the pathogenicity of Listeria monocytogenes. Some of the 41 LPXTG motifs predicted by reference strain are unknown. Cloning and bioinformatics analysis of the Lmo0160 gene of LPXTG motif from LM90SB2, Xinjiang sheep brain isolate of Listeria monocytogenes were carried out. [methods] specific primers were designed according to the lmo0160 sequence included in GenBank. The lmo0160 gene of Xinjiang isolate was amplified by PCR method. The amplified product was cloned into pMD 19-T vector. The nucleotide sequence and protein sequence of the gene were analyzed. [results] the total length of lmo0160 sequence of LM90SB2 was 1 708 BP, containing an open reading frame of 1 428bp, encoding 475-amino acid LM90SB2 strain lmo0160 nucleotide sequence and CFSAN008100 strain 4b type. The similarity of CFSAN023463 strains, FSAN023463 strains, J2-064 strains 4b, F2365 strains 4b, cheese, USA) and NTSN strain 4b, sheep brain, Yangzhou, China) is 99.0-99.1; the similarity with M7 strain 4a, milk, Zhejiang) is 97.2b, and the similarity with Finland1998 strain is 1 / 2a, the similarity is 97.2a, and the similarity is 97.2a with M7 strain 4a, milk, Zhejiang Province, China), and the similarity is 97.2a with Finland1998 strain 4b, cheese, USA) and NTSN strain 4b, sheep brain, Yangzhou, China. The similarity between N53-1 strain and EGD-e strain was 87.2 -91.1%, and the deduced amino acid sequence was 91.8-99.4 and 91.8% -99.4% respectively, and the similarity was 87.2-91.1% between N53-1 strain, cooked ham, N1546 strain (fish, Denmark) and EGD-e strain (1 / 2a, USA), and the deduced amino acid sequence was 91.8-99.4. Phylogenetic tree showed that the lmo0160 gene of LM90SB2 was closely related to CFSAN023463F2365 and NSTN, and was closely related to the standard EGD-e strain. The prediction of protein secondary structure showed that the Lmo0160 protein of LM90SB2 was hydrophilic, no signal peptide and no transmembrane structure. Protein domain prediction showed that Lmo0160 protein contained collagen binding domain and Cna B domain. [conclusion] lmo0160 gene of LM90SB2 was cloned, which laid a foundation for further study of lmo0160 gene function of LM90SB2.
【作者单位】： 石河子大学动物科技学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31360614)~~
【分类号】：S852.61

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