let-7b-5p靶向电针耐受大鼠Dusp1基因的研究

发布时间：2018-05-27 17:14

  本文选题：电针耐受 + miRNA　； 参考：《华中农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：细胞内miRNA能与mRNA 3‘UTR区结合,干扰基因的转录后表达。近些年在有关miRNA与疼痛的研究越来越受到人们的关注。研究表明miRNA let-7b在伤害感受器神经元中可通过TLR7/TRPA1影响疼痛。电针耐受是反复或持续电针引起的电针镇痛效应下降,是针刺治疗疼痛性疾病时的一种负调节。本实验室利用miRNA深度测序与侧脑室注射对应的agomir、antagomir,发现let-7b-5p在电针耐受中可能发挥着重要作用。利用靶基因预测软件预测发现Dusp1基因可能是let-7b-5p的靶基因。Dusp1基因转录、翻译成MKP-1,MKP-1是一类双向特异性苏/酪氨酸磷酸酯酶,不仅能使磷酸化的苏氨酸/丝氨酸去磷酸化,还可使磷酸化的酪氨酸去磷酸化。此外,MKP-1的特异性选择底物是p38,p38亦与炎症、疼痛有密切关系。另有研究表明,干扰MKP-1的活性,可调节MAPKs分子信号通路,进而减少疼痛发生,延缓疼痛发展。电针相关研究发现电针能显著降低足底炎性痛大鼠大脑核团中脑导水管周围灰质、延脑头端腹内侧核及脊髓背角p38MAPK的磷酸化水平,证明了MAPK信号通路在电针镇痛中的重要作用。本实验验证了let-7b-5p在大鼠神经元细胞中能干扰Dusp1基因的转录后水平,并进一步探索大鼠下丘脑中,let-7b-5p是否通过干扰Dusp1基因和(或)MKP-1蛋白表达量影响电针耐受。通过体外培养神经细胞与转染双荧光素报告酶载体,试验组与对照组相比,let-7b-5p显著抑制了psi CHECK2-Dusp1-3‘UTR-WT双荧光素酶报告载体的荧光活性,证明let-7b-5p的靶基因为Dusp1基因。后续试验选择6周龄雌性健康SD大鼠,共54只,体重210±20g。随机分成Ago+EA组、Atg+EA组和CT+EA组,每组18只。其中,Ago+EA组大鼠接受侧脑室注射agomir-let-7b-5p;Atg+EA组大鼠接受侧脑室注射antagomir-let-7b-5p;CT+EA组大鼠接受侧脑室注射stable negative control(随机碱基序列),侧脑室注射完成后立即对试验大鼠左后肢足底趾面注射0.1m L完全弗氏佐剂(CFA),建立炎症疼痛模型。完成注射后24h,电针试验大鼠双侧 足三里‖及 三阴交‖穴,每次持续30min,每天1次,共电针7次;每次电针前后,测定试验大鼠足底机械触痛阈和鼠尾热辐射痛阈值。于电针第1d、4d、7d,各组随机挑选6只,取下丘脑,用于测量下丘脑中MKP-1蛋白表达水平。实验结果显示:电针第1d至第4d,Atg+EA组大鼠足底机械痛阈变化率均显著高于Ago+EA组大鼠(p0.05);电针第1d与第3d,Ago+EA大鼠足底机械痛阈变化显著低于CT+EA组。测量大鼠鼠尾热辐射痛阈变化率,发现电针第1d至第7d Atg+EA组与Ago+EA组相比痛阈变化率均显著升高(p0.05),电针第5d至第7d痛阈变化率Atg+EA组显著高于CT+EA组(p0.05);电针第1 d、3 d与4 d,Ago+EA大鼠足底机械痛阈变化显著低于CT+EA组(p0.05)。MKP-1蛋白表达量测定显示,电针第1d,Ago+EA组MKP-1表达量相较其他两组显著降低(p0.05);电针第4d,CT+EA组MKP-1蛋白表达量与Atg+EA组没有显著差异(p0.05),但Ago+EA组MKP-1表达量仍显著低于另两组(p0.05);电针第7d,Atg+EA组MKP-1表达量显著高于另两组(p0.05),CT+EA组与Ago+EA组相比没有显著性差异(p0.05)。本实验通过体外靶基因验证和体内痛阈变化率和MKP-1蛋白表达水平的检测,确定了在大鼠下丘脑中,let-7b-5p可通过干扰Dusp1基因并影响MKP-1蛋白表达量影响电针耐受的形成。
[Abstract]:缁嗚優鍐卪iRNA鑳戒笌mRNA 3鈥楿TR鍖虹粨鍚，

本文编号：1943079