羽衣甘蓝粉色叶基因Pi锚定区域分子标记的开发

发布时间：2018-06-22 19:39

  本文选题：羽衣甘蓝 + 粉色叶基因Pi　； 参考：《沈阳农业大学》2016年硕士论文

【摘要】：羽衣甘蓝(Brassica oleracea var. acephala DC)是一种叶色十分丰富多变的二年生草花。由于其酷似牡丹的华丽外形以及喜欢冷凉气候的习性,在我国北方地区的绿化中脱颖而出。当温度低于15℃,中心叶由绿色转变为绚丽的颜色,具有较高观赏品质。本研究以粉色叶和白色叶羽衣甘蓝为亲本,利用初步定位侧翼标记筛选1359株超大F2群体,共获得68株重组株,对羽衣甘蓝粉色叶基因Pi进行了重新锚定,构建了遗传连锁图谱。利用芸薹属C基因组及拟南芥基因组数据库,分别获得了花青素生物合成调节基因、侧翼标记所在的Scaffold及其DNA序列,设计引物,在Pi锚定区域开发了新的DNA分子标记。主要研究结果如下：1.利用已获得的粉色叶基因Pi初步定位侧翼标记Ni2C12和Boac04,分别对超大F2群体进行逐一筛选,成功构建了羽衣甘蓝粉色叶基因重组群体,该重组群体共包含68株重组株。2.由于对Pi基因的初步定位利用184株F2群体,定位结果不够精确,本研究利用已构建的1359株超大F2群体,结合初定位侧翼标记对粉色叶基因Pi进行重新锚定,结果将初定位区域矫正在C03染色体的0-11 Mb区间内,且Pi基因位于C03染色体顶端,与标记Ni2C12的遗传距离为4.5 cM,与标记Boac04的遗传距离为8.5 cM,标记Ni2C12为距离粉色叶基因最近的侧翼标记。3.根据芸薹属C基因组及拟南芥基因组提供的基因注释信息,在甘蓝C03染色体0-16 Mb的区域内,成功挖掘76个花青素生物合成调节基因并设计合成了80对引物,其中74对引物可扩增出产物,扩增效率为91%。在亲本间具有多态性的标记共4个,且均为共显性标记。进一步筛选重组群体发现,4个共显性标记比初定位侧翼标记Boac04的重组株分别减少了16、10、16、13株,获得了与Pi基因更紧密连锁的分子标记。4.经比对发现Ni2C12位于甘蓝基因组Scaffold000123上,具体物理位置为555793-556023 bp。为了更为精确的搜索Ni2C12附近的SSR位点,运用SSRHunter对Scaffold000123的0-1 Mb区间进行SSR位点搜索,共搜索得到824个SSR位点,其中三核苷酸为重复基元的SSR数量为811个,占总SSR位点的98.42%。经同源性比对后筛选得到39条SSR序列,并设计SSR引物。35对SSR引物可以扩增出理想产物,且有14对在亲本及基因池间具有多态性,可用于羽衣甘蓝粉色叶基因精细定位的研究当中。
[Abstract]:Kale (Brassica oleracea var. acephala DC) is a kind of biennial flowers with rich leaf color. Because of its gorgeous appearance like peony and the habit of like cool climate, it stands out in the greening of northern China. When the temperature is lower than 15 鈩，

本文编号：2054014