水曲柳SOC1、AG基因的克隆和遗传转化分析

发布时间：2018-07-18 15:17

【摘要】：SOC1基因是开花时间调控基因,AG基因是控制高等植物花器官发育基因,这两个基因在花发育过程中起着重要的调控作用。本研究对水曲柳SOC1和AG基因编码区进行了克隆,分别命名为FmSOC1和FmAG。并成功构建了植物表达载体pROK Ⅱ-35S::FmSOC1和 pCAMBIA1301-35S::FmAG,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术,成功转入烟草中,获得了转FmSOC1口FmAG烟草T0植株。主要结果如下：1、FmSOC1和FmAG基因编码区全长的克隆及生物信息学分析本研究获得了FmSOC1和FmAG基因全长序列,FmSOC1基因编码区全长为654bp,与水曲柳转录组中SOCl序列核苷酸一致性为93%,预测编码氨基酸长度为218aa,编码蛋白的分子量为24920.43,等电点pI为9.40,不稳定系数为61.33,是不稳定蛋白,亚细胞定位分析显示FmSOC1基因在细胞核、叶绿体和线粒体中均表达,聚类分析显示FmSOC1蛋白与芝麻、宽叶车前和金鱼草中SOC1同源蛋白亲缘关系最近；FmAG基因编码区全长为726bp,与水曲柳转录组中AG序列核苷酸一致性为98%,预测的氨基酸长度为242aa,编码蛋白的分子量为27913.51,等电点pI为9.25,不稳定系数为67.48,是不稳定蛋白,亚细胞定位分析显示FmAG基因在细胞核中,聚类分析显示FmAG蛋白与美国红h！⒔鹩悴莺椭ヂ橹蠥G同源蛋白亲缘关系最近。2、植物表达载体pROK Ⅱ-35S::FmSOC1和pCAMBIA1301-35S::FmA G的构建及遗传转化体系的优化构建了Xba Ⅰ/Sac Ⅰ双酶切pROK Ⅱ-35S:.FmSOCl和Nco Ⅰ单酶切pCAMBIA1301-35S:: FmAG植物表达载体,转入根癌农杆菌LBA4404中,本研究优化了农杆菌介导的烟草遗传转化体系,结果为：外植体经预培养2d,用OD_(600)值0.8的农杆菌LBA4404转入植物表达载体pROK Ⅱ-35S::FmSOCl 和 pCAMBIA1301-35S::FmAG菌液浸染25min,再共培养3d,有利于提高遗传转化效率。不定芽筛选中,卡那霉素和潮霉素浓度分别为50mg/L和2Omg/L时适于农杆菌侵染后的脱菌和抑菌操作。3、转基因烟草遗传转化及分子鉴定PCR和PCR-Southern杂交检测转基因烟草To代植株,初步证实外源FmSOC1基因整合到了烟草的基因组中,转化率为31.58%。随机选取经PCR检测为阳性的烟草苗5株进行RT-PCR分析,发现有3株SOC1基因检测到基因转录,从形态学上观察发现转SOC1基因的烟草比野生型烟草提前开花。
[Abstract]:SOC1 gene is the flowering control gene AG gene is the control of higher plant floral organ development genes these two genes play an important role in the flower development process. In this study, the coding region of SOC1 and AG of Fraxinus mandshurica was cloned and named FmSOC1 and FmAG, respectively. The plant expression vectors pROK 鈪，

本文编号：2132313