转基因阿尔巴斯白绒山羊外源DsRed基因拷贝数与外源基因表达的关系

发布时间：2018-10-30 21:03

【摘要】：转基因动物的外源基因通过使用体细胞克隆与胚胎移植的方法将表达载体转入细胞后获得,大多以随机整合的形式存在于受体动物的基因组中,而转基因动物中外源基因的整合拷贝数是影响外源基因表达水平及遗传稳定性的重要因素之一,作为转基因动物遗传稳定性的鉴定指标,获得存活的转基因动物后便有必要对其外源基因拷贝数进行检测。为了研究转基因阿尔巴斯白绒山羊(Capra hircus)基因组内外源海葵红色荧光蛋白(red fluorescence protein from Discosoma sp.,Ds Red)基因的拷贝数与其表达量之间是否存在一定的联系,本研究采用较鉴定外源基因拷贝数的传统方法DNA印迹杂交(Southern blot)更为高效率、高灵敏度、高准确性的绝对定量q RT-PCR法检测了6只转基因白绒山羊外源Ds Red基因表达框中3个不同片段的拷贝数。结果表明,外源基因3个片段的拷贝数分别为巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)启动子:2.80±0.38~13.68±0.16;Ds Red基因:1.34±0.04~11.84±0.02;CMV启动子与Ds Red连接处:1.58±0.04~19.22±0.38。通过q RT-PCR中相对定量的方法检测了6只转基因白绒山羊外源Ds Red基因m RNA表达量,将其与外源基因中3个不同片段的拷贝数数据分别使用SPSS软件进行相关性分析后,相关性系数P值的结果为:CMV启动子为P=0.763;Ds Red基因为P=0.665;CMV启动子与Ds Red连接处为P=0.803,3组P值均大于0.05,无显著性相关。上述结果表明,在所检测的6只转基因阿尔巴斯白绒山羊中外源CMV启动子启动的Ds Red基因的表达量与其在转基因白绒山羊基因组内的拷贝数在0.05的水平没有显著相关性。另外验证了绝对定量q RT-PCR法在大型转基因家畜的外源基因拷贝数的研究中的可靠性:其重复性良好,误差可控,可以成为检测转基因动物外源基因拷贝数的首选方法。
[Abstract]:The foreign genes of transgenic animals were transformed into cells by somatic cell cloning and embryo transfer, and most of them existed in the genome of recipient animals in the form of random integration. The integrative copy number of foreign genes in transgenic animals is one of the important factors that affect the expression level and genetic stability of foreign genes, which is used as the identification index of genetic stability of transgenic animals. After the survival of transgenic animals, it is necessary to detect the copy number of foreign genes. In order to study the relationship between the copy number and the expression level of the (Capra hircus) gene of the transgenic Albus white cashmere goat, the internal and external (red fluorescence protein from Discosoma sp.,Ds Red gene of sea anemone was studied. In this study, DNA blotting (Southern blot) was more efficient and sensitive than the traditional method of identifying the copy number of foreign genes. The copy numbers of three different fragments of exogenous Ds Red gene expression frame of 6 transgenic white cashmere goats were detected by absolute quantitative Q RT-PCR method. The results showed that the copy number of the three fragments of exogenous gene was cytomegalovirus (Cytomegalovirus,CMV) promoter: 2.80 卤0.38C 13.68 卤0.16Ds Red gene: 1.34 卤0.04nb 11.84 卤0.02; The junction between CMV promoter and Ds Red was 1.58 卤0.04 卤19.22 卤0.38. The expression of exogenous Ds Red gene m RNA in 6 transgenic white cashmere goats was detected by using the relative quantitative method in Q RT-PCR. The correlation between the expression of m RNA and the copy number data of three different fragments of exogenous gene was analyzed by SPSS software. The correlation coefficient P value was: the CMV promoter was P0. 763; There was no significant correlation between the P value of Ds Red group 0.803 and P0. 803 because of the connection between Ds Red promoter and P0. 665CMV promoter, P value was higher than 0. 05, there was no significant correlation between P0. 665 and P0. 803 group. The results showed that there was no significant correlation between the expression of Ds Red gene and the number of copies in the genomes of the transgenic white cashmere goats at the level of 0.05, which was initiated by the foreign CMV promoter of 6 transgenic Albus white cashmere goats. In addition, the reliability of the absolute quantitative Q RT-PCR method in the study of foreign gene copy number of large transgenic domestic animals was verified: its reproducibility was good, the error was controllable, and it could be used as the preferred method to detect the foreign gene copy number of transgenic animals.
【作者单位】： 内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室;
【基金】：国家转基因生物新品种培育重大专项(No.2014ZX08008-002)
【分类号】：S827

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本文编号：2301177