宏基因组中新角蛋白酶基因KerA的克隆与鉴定

发布时间：2018-12-28 10:02

【摘要】：皮革鞣制过程中产生大量有害物质,对环境造成了严重污染。角蛋白酶是一类水解角蛋白的酶,是皮革鞣制中理想的鞣制剂替代品。为了发掘角蛋白酶重要的基因资源,试验从土壤中克隆KerA基因,构建了原核表达载体p ET-22b-KerA,通过热激法转入BL21(DE3)中进行表达并在表达时间上进行了优化,对表达的产物进行Western-blot鉴定,通过Ni2+Sepharose Fast Flow分离纯化了KerA,并通过水解角蛋白验证其活性。结果表明:克隆的KerA基因可以在原核中表达,并具有水解角蛋白的活性。说明基因工程重组手段生产KerA具有可行性。
[Abstract]:A large number of harmful substances are produced in the leather tanning process, which causes serious pollution to the environment. Keratinase is a kind of enzyme that hydrolyzes keratin and is an ideal substitute for tanning agent in leather tanning. In order to explore the important gene resources of keratinase, the KerA gene was cloned from soil. The prokaryotic expression vector p ET-22b-KerA, was transformed into BL21 (DE3) by heat shock and the expression time was optimized. The expressed product was identified by Western-blot, KerA, was isolated and purified by Ni2 Sepharose Fast Flow, and its activity was verified by hydrolytic keratin. The results showed that the cloned KerA gene could be expressed in prokaryotic cells and had the activity of hydrolyzing keratin. It is feasible to produce KerA by genetic engineering recombination.
【作者单位】： 吉林农业大学农学院;温州大学生命科学研究院;吉林省农业科学院农业生物技术研究所;
【基金】：现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS-35-02)
【分类号】：Q78;Q55

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 韩晓宇;刘亚洁;李江;;角蛋白酶基因工程研究[J];东华理工学院学报;2007年03期

2 李明珠;王雁萍;秦广雍;;角蛋白酶的研究现状及发展前景[J];安徽农业科学;2010年04期

3 杨得坡,Jean－Pierre Chaumont,彭劲甫,王发松,Joёlle Millet;角蛋白酶在真菌侵染皮肤过程中的作用[J];微生物学杂志;2000年02期

4 狄瑛,贺筱蓉,姚淑敏;角蛋白酶及其研究进展[J];天然产物研究与开发;2001年04期

5 李江;姚斌;范云六;;微生物角蛋白酶的分子生物学研究进展[J];工业微生物;2006年03期

6 杨珊;刘孟华;吴重德;周荣清;石碧;;角蛋白酶应用研究现状及展望[J];四川食品与发酵;2006年04期

7 梁建东;韩燕峰;梁宗琦;张纪伟;;产角蛋白酶耐热金孢菌的初筛研究[J];菌物研究;2007年04期

8 蔡成岗;郑晓冬;;以羽毛为底物发酵产角蛋白酶培养基的优化[J];科技通报;2009年04期

9 谢菲;李从虎;郑佳;陈欣;黄钧;周荣清;;角蛋白酶生产菌株的分离筛选与鉴定[J];微生物学报;2010年04期

10 赵小东,付萌,王冬青,孙林潮,张海龙,刘红娟,刘玉峰;角蛋白与毛发诱导须癣毛癣菌产生角蛋白酶的比较[J];中国美容医学;2004年05期

相关会议论文 前3条

1 梁建东;韩燕峰;梁宗琦;;产角蛋白酶耐热金孢菌的初筛研究[A];第八届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2007年

2 游银伟;尤升波;岳寿松;;产角蛋白酶芽孢菌YYW-1的鉴定及产酶性质分析[A];中华预防医学会微生态学第二届特种医学暨河南省、山东省预防医学会微生态学学术研讨会论文集[C];2006年

3 张毅;申志强;钟玉宜;李加琪;;羽毛角蛋白分解菌的分离及其角蛋白酶酶活特性的研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年

相关博士学位论文 前5条

1 方真;Stenotrophomonas maltophilia角蛋白酶的分子改造[D];江南大学;2017年

2 蔡成岗;角蛋白酶生产菌株选育、发酵与分离纯化研究[D];浙江大学;2007年

3 刘柏宏;Bacillus licheniformis角蛋白酶的高效表达、热稳定性及底物特异性改造[D];江南大学;2015年

4 胡洪;角蛋白酶基因工程菌的构建和表达及重组酶酶学性质与功效研究[D];四川农业大学;2013年

5 吕龙贤;L-抗坏血酸芳香酸酯酶法合成及微生物角蛋白酶研究[D];浙江大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 闵杰;金黄杆菌来源的角蛋白酶的分离纯化和酶学性质研究[D];浙江大学;2008年

2 王涛;产角蛋白酶耐热菌的选育及发酵初步研究[D];山东轻工业学院;2012年

3 朱茜;角蛋白单体诱导Stenotrophomonas maltophilia DHHJ菌株产角蛋白酶解析[D];东华大学;2016年

4 高静雷;定向进化技术提高枯草芽孢杆菌角蛋白酶活性研究[D];四川农业大学;2014年

5 高洁;毕赤酵母角蛋白酶基因工程菌产酶培养基适宜碳源选择及重组酶在生长猪上的应用研究[D];四川农业大学;2014年

6 张晓玮;角蛋白降解菌的分离、鉴定及其角蛋白酶的性质和应用研究[D];山东大学;2016年

7 李光磊;Stenotrophomonas maltophilia角蛋白酶在毕赤酵母中的表达及发酵过程优化[D];江南大学;2016年

8 杨连;解淀粉芽孢杆菌来源角蛋白酶的高效表达及羽毛降解工程菌的构建[D];中国农业科学院;2016年

9 许佳惠;角蛋白酶毕赤酵母工程菌的构建及酶学性质研究[D];华中农业大学;2016年

10 陈忱;深海角蛋白降解菌Bacillus aquimaris JM7的发酵条件优化及功能基因的克隆表达[D];国家海洋局第三海洋研究所;2016年

，

本文编号：2393813