甜樱桃AsA合成基因GGP的克隆及在果实发育过程的表达

发布时间：2019-07-12 18:18

【摘要】：GGP(GDP-L-galactose phosphorylase)参与植物AsA合成过程。本研究以甜樱桃‘佐藤锦’(Satonishiki)为材料,采用PCR法,首次在甜樱桃上克隆了AsA合成相关基因PacGGP1和PacGGP2,基因片段长度分别为1 297 bp和1 765 bp,分别包含1 107 bp和1 341 bp,并分别编码368和446个氨基酸。通过氨基酸序列比对结果发现,与甜樱桃PacGGP1同源性较高的是枣GGP1,相似度100%,与甜樱桃PacGGP2同源性较高的是碧桃GGP2,相似度在98%左右。采用RT-PCR方法分析了PacGGP1和PacGGP2的表达模式。研究表明PacGGP2基因在‘佐藤锦’甜樱桃品种中的表达变化模式与T-AsA的含量变化趋势表现出明显的相似性,推测它可能是AsA L-半乳糖合成途径中的关键基因,可为甜樱桃分子育种奠定重要基础。
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图片说明： ningofGGPGeneandItsExpressionAnalysisduringFruitDevelopmentfromPrunusaviumL.冰箱-80℃备用3.2RNA提娶基因克隆以甜樱桃果实为材料，提取总RNA，-80℃保存。利用同源克隆法设计PCR引物(表1)。以总RNA为模板，，反转录合成的第一链cDNA为模板进行PCR扩增，PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测，切胶，回收目的条带，连接pMD19-T克隆载体并测序，DNA测序成都擎科生物公司完成。所得序列用Blast搜索引擎在NCBI数据库中进行同源性查找。测序后的目的基因片段用DNAs-tarEditSeq软件去除载体序列后拼接获得cDNA全图2GGP1(A)和GGP2(B)基因推导的氨基酸与其他植物的系统发育树注:A:GGP1基因推导的氨基酸与其他植物的系统发育树;B:GGP2基因推导的氨基酸与其他植物的系统发育树Figure2PhylogenetictreeofthededucedaminoacidsequencesofGGP1(A)andGGP2(B)geneNote:A:PhylogenetictreeofthededucedaminoacidsequencesofGGP1;B:PhylogenetictreeofthededucedaminoacidsequencesofGGP2图3甜樱桃果实T-AsA含量及GGP1和GGP2基因的表达量变化注:A:甜樱桃果实T-AsA含量(mg/100gFW);B:生长过程AsA合成途径GGP1和GGP2基因的相对表达量变化Figure3ChangesofT-AsAconcentrationaswellasGGP1andGGP2expressionlevelsinthesweetcherryfruitNote:A:ChangesofthemainT-AsAconcentrations(mg/100gFW)inthefruits;B:ChangesofGGP1andGGP2genesinvolvedAsAbiosynthesissystemduringfruitgrowthofP.avium长，并分析目的基因全长cDNA序列的开放阅读框，采用DNAman软件推导相应的氨基酸序列。ClustalX软件对不同植物相关基因的氨基酸序列进行多重比对，利用MEGA5.0软件绘制系统进化树。3.3AsA的含量测定参考Ka
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本文编号：2513891