刚毛柽柳ThPP2C基因的克隆和表达分析
发布时间：2019-10-08 03:46
【摘要】：蛋白磷酸酶2C(PP2C)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,在体内以单体形式存在,由它催化的可逆磷酸化反应是细胞信号转导的重要组成部分,这一过程几乎参与所有的生理和病理过程。本研究从柽柳中克隆获得一条PP2C基因,命名为ThPP2C。该基因开放读码框(ORF)长849 bp,编码282氨基酸,推测蛋白质分子量为30.54 kDa,理论等电点为7.13。qRT-PCR结果显示,0.4 mol·L~(-1)NaCl、20%(w/v)PEG6000、150μmol·L~(-1)ABA和100μmol·L~(-1)JA胁迫处理后,ThPP2C基因在刚毛柽柳根和叶中的表达均发生了明显改变,但时空表达模式不完全相同。NaCl、ABA和JA处理后ThPP2C基因在叶中都表现为下调表达。而根中,NaCl和JA胁迫后主要表现为上调表达。ABA处理早期表达下调,随后表达量逐渐增加。与其他3种胁迫不同的是,PEG6000处理后ThPP2C基因在根中明显下调,而在叶中胁迫早期表现不明显,48 h后被高度诱导。表明ThPP2C基因可能参与了刚毛柽柳高盐、干旱以及激素处理的适应过程,但其功能还有待进一步验证。
【图文】：
图1柽柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝胶电泳;B．柽柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ扩增;C．柽柳内参和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ扩增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene图2ThPP2C基因与其它物种PP2C基因的多序列比对注M1/M2．二价金属离子结合位点;1～3．保守功能区Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同处理后ThPP2C基因的表达分析为了初步分析ThPP2C基因的逆境胁迫应答功能，利用qＲT-PCＲ技术分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA胁迫处理后刚毛柽柳根和叶中ThPP2C基因相对表达情况(图4)。结果显示:在NaCl处理后，根中ThPP2C基因表达在胁迫早期(6h)明显受抑制(仅为对照的3．8%)，随后被上调表达，胁迫48h时表达量最高，为对照的3．80倍。叶中所有时间点都表现为下调表达，其中24h时表达量最低，仅为对照的2．3%。与NaCl胁迫不同，PEG处理后根中ThPP2C基因的表达均398植物研究37卷
图1柽柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝胶电泳;B．柽柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ扩增;C．柽柳内参和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ扩增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene图2ThPP2C基因与其它物种PP2C基因的多序列比对注M1/M2．二价金属离子结合位点;1～3．保守功能区Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同处理后ThPP2C基因的表达分析为了初步分析ThPP2C基因的逆境胁迫应答功能，利用qＲT-PCＲ技术分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA胁迫处理后刚毛柽柳根和叶中ThPP2C基因相对表达情况(图4)。结果显示:在NaCl处理后，，根中ThPP2C基因表达在胁迫早期(6h)明显受抑制(仅为对照的3．8%)，随后被上调表达，胁迫48h时表达量最高，为对照的3．80倍。叶中所有时间点都表现为下调表达，其中24h时表达量最低，仅为对照的2．3%。与NaCl胁迫不同，PEG处理后根中ThPP2C基因的表达均398植物研究37卷
【作者单位】： 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室;
【基金】：黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12523017)~~
【分类号】：Q943.2;S793.5
本文编号：2546075
【图文】：
图1柽柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝胶电泳;B．柽柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ扩增;C．柽柳内参和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ扩增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene图2ThPP2C基因与其它物种PP2C基因的多序列比对注M1/M2．二价金属离子结合位点;1～3．保守功能区Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同处理后ThPP2C基因的表达分析为了初步分析ThPP2C基因的逆境胁迫应答功能，利用qＲT-PCＲ技术分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA胁迫处理后刚毛柽柳根和叶中ThPP2C基因相对表达情况(图4)。结果显示:在NaCl处理后，根中ThPP2C基因表达在胁迫早期(6h)明显受抑制(仅为对照的3．8%)，随后被上调表达，胁迫48h时表达量最高，为对照的3．80倍。叶中所有时间点都表现为下调表达，其中24h时表达量最低，仅为对照的2．3%。与NaCl胁迫不同，PEG处理后根中ThPP2C基因的表达均398植物研究37卷
图1柽柳ThPP2C基因的克隆A．ＲNA凝胶电泳;B．柽柳ThPP2C基因ＲT-PCＲ扩增;C．柽柳内参和ThPP2C基因引物ＲT-PCＲ扩增Fig．1CloningofThPP2CgenefromT．hispidaA．ＲNAgelelectrophoresis;B．ＲT-PCＲamplificationofThPP2Cgene;C．ＲT-PCＲamplificationofT．hispidainternalcontrolandThPP2Cgene图2ThPP2C基因与其它物种PP2C基因的多序列比对注M1/M2．二价金属离子结合位点;1～3．保守功能区Fig．2ThemultiplesequencealignmentofThPP2CwithotherspeciesPP2CgeneM1/M2．Divalentmetalionbindingsites;1－3．Conservativefunctionalareas2．3不同处理后ThPP2C基因的表达分析为了初步分析ThPP2C基因的逆境胁迫应答功能，利用qＲT-PCＲ技术分析了0．4mol·L－1NaCl、20%PEG6000、150μmol·L－1ABA和100μmol·L－1JA胁迫处理后刚毛柽柳根和叶中ThPP2C基因相对表达情况(图4)。结果显示:在NaCl处理后，，根中ThPP2C基因表达在胁迫早期(6h)明显受抑制(仅为对照的3．8%)，随后被上调表达，胁迫48h时表达量最高，为对照的3．80倍。叶中所有时间点都表现为下调表达，其中24h时表达量最低，仅为对照的2．3%。与NaCl胁迫不同，PEG处理后根中ThPP2C基因的表达均398植物研究37卷
【作者单位】： 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室;
【基金】：黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12523017)~~
【分类号】：Q943.2;S793.5
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本文编号：2546075
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