MAL基因的表观遗传学调控对NSCLC吉非替尼敏感性的影响及机制研究

发布时间：2019-10-15 15:55

【摘要】：近年来肺癌在我国发病率和死亡率持续升高,已位居我国恶性肿瘤死亡原因的首位,而非小细胞肺癌(NSCLC)是其中占比最高的肿瘤类型。由于传统化疗药物对NSCLC效果有限、副作用大,吉非替尼(Gefitinib,Gef)等分子靶向药物已成为NSCLC治疗的新策略。但是获得性耐药问题十分严重,成为影响其临床效果的主要原因。表观遗传学机制是近年来肿瘤领域的研究热点,已在多种抗肿瘤药物的耐药机制中得到认可。本研究从实验室前期基因芯片结果出发,探究T细胞分化蛋白(Myelin and lymphocyte protein,MAL)抑癌基因在NSCLC对Gef耐药中的作用及机制,旨在克服耐药或增加药物敏感性。第一部分MAL基因的表观遗传学调控对Gef敏感性的影响目的:探究不同NSCLC细胞中MAL基因表达量与Gef敏感性的关系,并研究MAL基因下调的可能机制及其逆转对Gef敏感性的影响。方法:MTT法检测Gef对不同NSCLC细胞系的增殖抑制作用;RT-PCR及Western Blotting检测细胞中MAL基因表达量;MSP检测细胞中MAL基因转录起始区域甲基化状态;探究表观遗传学药物DAC、SAHA预处理对MAL基因和Gef敏感性的影响。结果:MAL基因在Gef敏感和耐药NSCLC细胞中呈现明显差异表达,4/5耐药细胞中MAL m RNA及蛋白表达下调或缺失,MAL表达量可能与细胞对Gef敏感性有关;耐药细胞中MAL基因转录起始区域呈现高甲基化,可能是MAL表达沉默的主要原因;DAC处理可明显逆转MAL基因高甲基化,恢复MAL m RNA表达,和SAHA联用后表达促进更明显;恢复MAL表达的耐药细胞对Gef敏感性显著增加。结论:Gef耐药的NSCLC细胞中MAL表达普遍下调或缺失,转录起始区域高甲基化可能是主要原因;逆转高甲基化状态、恢复MAL m RNA表达可增加耐药细胞对Gef的敏感性。第二部分MAL基因恢复表达可增敏Gef的相关机制研究目的:以PC9/G、H1975两种耐药细胞为研究对象,探究表观遗传学药物恢复MAL表达可增敏Gef的相关机制。方法:MTT等方法检测耐药细胞中恢复MAL表达对Gef敏感性的影响;CCK-8法、流式细胞术及细胞划痕试验等检测MAL表达上调对细胞增殖与集落形成、凋亡与周期、细胞迁移能力等生物学行为的影响;Western Blotting检测细胞中MAL表达上调对EGFR信号相关通路的影响;探究四种多酚化合物对MAL基因表达及Gef敏感性的影响。结果:DAC单用或联合SAHA可明显恢复PC9/G、H1975细胞中MAL蛋白表达,显著增加对Gef敏感性;DAC、SAHA联用恢复MAL表达可使PC9/G细胞形态更为铺展,显著抑制细胞增殖、集落形成及迁移能力,并促进细胞早期凋亡和G2/M期阻滞;耐药细胞恢复MAL表达可降低EGFR途径信号磷酸化水平,加速EGF或Gef刺激下相关信号蛋白激活、降解的经时过程;DAC、SAHA联用可增加细胞中上皮标志分子E-Cadherin表达;白藜芦醇、杨梅素等天然多酚化合物能不同程度地增加PC9/G细胞对Gef敏感性,降低MAL基因甲基化、促进MAL m RNA表达。结论:DAC、SAHA联用恢复MAL表达可影响耐药细胞形态,显著抑制细胞增殖,促进细胞早期凋亡,抑制细胞迁移和集落形成能力,进而增加细胞对Gef敏感性;降低EGFR途径信号磷酸化水平、影响激活和降解的经时过程,增加上皮标志分子E-Cadherin表达可能是相关分子机制;MAL基因表达量有可能作为NSCLC对Gef敏感性的独立预测指标。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2

【参考文献】