【摘要】：中华鳖是我国尤其是南方地区的重要水产养殖品种之一,它不仅味道鲜美更蕴含很高的药用价值。近年来,随着国民经济水平的提高和我国水产养殖业的大力发展,人们对于中华鳖的购买力度和需求不断提升,这也使得中华鳖的养殖生产规模不断扩大,高密度集约化的养殖生产成为常态,但同时也引发了诸多问题。养殖水体环境不断恶化,种质资源严重退化,这都导致中华鳖频繁应激以致疾病频发,成活率降低,对养殖生产造成巨大损失。应激是指机体所处环境发生变化或由其他因素导致机体自身稳态失衡的状况,其广泛存在于各种动植物体内。当机体在受到外界刺激时,会促使肾上腺皮质对糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的分泌量增加。糖皮质激素也被称为“肾上腺皮质激素”,GC不仅能够调控蛋白质、糖类以及脂类的合成,更参与调节这些物质的代谢过程。GC还具有抗炎作用,是生物体对外界环境胁迫响应的重要组成部分,而爬行动物如龟鳖等的糖皮质激素主要为皮质酮(Corticosterone,CORT)。应激反应能够在一定程度上调节机体稳态,使机体保持健康状态,但长期处于应激状态会使皮质酮水平持续处于升高状态从而抑制机体免疫能力,对自身的生长和免疫能力产生巨大危害。本实验对正常生长状态下的中华鳖不同月龄、不同性别和不同体重间的血浆皮质酮水平含量进行了研究分析;并以28℃条件下的中华鳖为恒温对照组,研究不同程度的温度变化(10℃、20℃、33℃)对1冬龄体重差异不大的中华鳖血浆CORT水平、免疫生化指标以及血浆抑菌效果的影响,并对不同温度环境条件下的中华鳖皮质酮合成酶相关的基因MC2R(Melanocortin-2 receptor,即黑素皮质素2型受体,又称促肾上腺皮质激素受体:Adreno Cortico Hormones Receptor,ACTH-R)、NR4A1(Nuclear Receptor Subfamily 4 Group A Member 1,皮质酮合成酶的转录因子之一)的表达进行了初步研究探索,实验拟为中华鳖温度免疫应激研究及养殖生产提供基础数据。实验的具体研究内容如下:1.中华鳖本底水平CORT研究不同月龄大小的中华鳖其体重会随着月龄的增加呈现出明显的上升趋势,而不同月龄中华鳖个体间其体重都有极显著性的差异(P0.01);伴随月龄的增加CORT的含量呈现出下降的趋势,并且12月龄个体的血浆CORT含量显著高于于24月龄(P0.01);中华鳖同一性别不同月龄间体重均有极显著性差异(P0.01),但在相同月龄内雌雄个体间其体重并无显著性差异(P0.05),且同一月龄中华鳖不同性别间CORT含量无显著性差异(P0.05);对同一月龄以及整体不同月龄(12、18、24月龄总体)中华鳖的体重和CORT含量进行线性分析结果显示,体重与CORT含量之间有一定的相关性,且CORT随体重的增加呈下降趋势,但二者间的关联性不大。2.温度变化对中华鳖血浆皮质酮含量的影响当环境温度变化时,10℃和20℃组的中华鳖血浆CORT含量随处理时间的增加呈先升后降的变化,且在4 h和6 h时与对照组有显著性差异(P0.05);33℃处理组的血浆CORT含量随处理时间的增加呈波动性变化,且与对照组间不存在显著性差异(P0.05)。此外,各个温度处理组除33-12(33℃处理12 h)的中华鳖血浆CORT含量相较于对照组略低外,其他各个温度处理组的CORT含量均高于对照组。3.温度变化对中华鳖血浆生化免疫指标及抑菌效果的影响随着中华鳖在不同温度条件下处理时间的增加,其体内血浆的酶活性和蛋白含量出现先升后降的变化,但这种动态变化与对照组不存在显著性的差异(P0.05);与对照组相比,溶菌酶(Lysozyme,LZM)的含量整体升高,而总蛋白(Total Protein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)的含量和活性整体下降。中华鳖血浆抑菌效果以恒温对照组(28℃)最佳,在同一时间处理段,随着温度变化幅度增加,抑菌效果逐渐变弱,且10℃组的抑菌效果最差;而在同一温度内,随着温度处理时间的增加,血浆抑菌效果先逐渐变差,然后渐渐恢复,且抑菌效果在4 h和6 h时最差。实验结果表明,血浆的抑菌效果与皮质酮水平的变化是相关的,伴随皮质酮的水平升高血浆抑菌效果变差。4.温度变化对中华鳖MC2R基因表达的影响中华鳖MC2R基因在肾上腺的表达量较心、肝、脾、肾以及肌肉和脑高出很多,表现出其特异性地表达模式。而各温度处理组的肾上腺组织MC2R基因的相对表达量均大于恒温对照组(28℃),且组织表达量随温度处理时间的增加而增大,呈现出上升趋势。中华鳖各温度处理组MC2R基因的表达量与CORT含量随温度处理时间的增加趋势表现出一定的滞后性,但与对照相比可以明显看出其表达量的增加;此外,各温度处理组肾上腺组织中NR4A1基因的相对表达量整体呈先降后升的变化趋势;其中10℃和20℃温度组的表达量在4 h时下降,6 h时上升,而12 h时表达量接近恒温对照组(28℃),这与不同温度条件下的血浆皮质酮变化情况基本相同。MC2R和NR4A1基因表达的结果从分子水平进一步验证了温度变化确实使中华鳖产生了应激反应。
【图文】：
图 1-1 各月龄中华鳖体重、CORT 含量差异比较Fig 1-1 Comparison of body weight and CORT contents of Chinese soft-shell turtle at differentAges注：“**”的表示二者间有极显著性差异Note: There is a extremely significant differences between the samples marked with "**"2.2 体重和 CORT 含量比较以体重为横坐标，，CORT 为纵坐标，对不同月龄以及整体（12、18、24 月龄总体）中华鳖的体重和 CORT 含量进行线性分析得到图 1-2。结果显示，体重与CORT 含量之间有一定的相关性，CORT 随体重的增加呈下降趋势，但这种关联性不大（12 月龄 R2=0.0313，18 月龄 R2=0.1259，24 月龄 R2=0.3128；总体 R2=0.1360）。
图 1-2 体重和 CORT 线性分析比较Fig 1-2 Weight and CORT linear analysis2.3 不同性别个体间 CORT 含量比较分别对各月龄中华鳖不同性别间的 CORT 含量做图，得到图 1-3。由图 1-3 可以看出，12 月龄中华鳖雄性个体 CORT 水平较雌性高，而 18 月龄和 24 月龄雌雄个体间 CORT 含量则基本相同；通过使用 SPSS 软件进行差异显著性分析分析，结果表明，同一月龄中华鳖不同性别间 CORT 含量无显著性差异（P>0.05）。
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4
【参考文献】
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9 陈献稿;林修喜;;中华鳖三群体幼鳖阶段养殖性能的比较[J];浙江农业科学;2013年02期
10 肖菊平;田虹;曾俊伟;肖智;刘晓红;;皮质酮促进大鼠脊髓背角星形胶质细胞糖皮质激素受体表达[J];遵义医学院学报;2012年05期
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