第一部分:基因多态性与成年起病非手术性甲状旁腺功能减退症的关联研究 第二部分:非手术性甲状旁腺功能减退症与假性甲状旁腺功

发布时间：2020-04-14 08:21

【摘要】：背景及目的非手术性甲状旁腺功能减退症(non-surgicalhypoparathtroidism,Ns-HypoPT)是由除手术以外的其他病因如遗传因素、免疫因素等引起甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)合成、分泌或作用障碍,引起机体钙磷代谢紊乱的疾病。目前成年起病Ns-HypoPT病因尚未明确。近年来国内外有关单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)与原发性甲状旁腺功能亢进症发生及临床表型的关联研究较多,但仅有两个研究分别分析了PTH、R基因个别SNPs与Ns-HypoPT发病及临床特点的相关性。本研究旨在探讨目前已知的与甲旁减发病相关的基因,其基因多态性与成年起病Ns-HypoPT发生及临床表型的相关性。方法通过PubMed数据库查找目前发现与Ns-HypoPT发病及临床表型相关的基因作为候选基因,包括 CASR、GNA11、PTH、TBX1、AIRE、GATA3、GCM2、TBCE、FAM111A、SOX3、VDR、CLDN16 和 TRPM6。用 NCBI、1000 Genomes 和 Hapmap 数据库筛选候选基因位于功能区域(3'UTR、5'UTR、启动子区及外显子区)的SNPs,且在中国汉族人群的最小等位基因频率5%,并通过 SNP Function Prediction、miRDB、microRNA.org、TargetScan 7.0 和 PolymiRTS Database 软件预测 3'UTR 区 SNPs 与 miRNA 的结合性,使用SNP Function Prediction、PROMO、TFBind 软件预测 5'UTR 或启动子区的 SNPs 是否为转录因子结合序列。选取至少2个软件预测结果一致的位点。因GNA11基因功能区域SNPs在病例-对照组间存在分布差异,故同时纳入GNA11基因的10个TagSNPs,一同设计成芯片,应用飞行时间质谱法(MassARRAY)对纳入的203例成年起病Ns-HypoPT和209例年龄及性别匹配的正常对照进行基因分型,Sanger测序验证分型结果的准确性,利用卡方检验、logistic回归分析上述SNPs与成年起病Ns-HypoPT发病及临床表现的相关性。结果1、从上述13个候选基因中筛选出符合条件的SNPs,并选择基因分型成功率在95%,在对照组中符合Hardy-Weinberg平衡的位点,Sanger测序验证准确性达100%,最终共有37个位点进入统计学分析;2、只有GNA11基因SNPs在病例-对照组间的分布有显著差异,其中rs11084997位点C等位基因降低Ns-HypoPT发病风险[OR=0.382(加性模型)、0.647(显性模型),P0.05),rs308060位点T等位基因增加Ns-HypoPT发病风险[OR=3.269(加性模型)、2.864(显性模型)、2.727(隐性模型),P0.05)]。3、在病例-对照组间比较GNA11基因13个位点组成的单体型分布频率,由rs11084997及rs4806907少见等位基因组成的CC单体型在病例组的分布频率低于对照组(P0.05)。由rs308060位点少见等位基因T及其他位点组成的单体型TTCGCC在病例组的分布频率更高(P0.05)。4、GNA11基因SNPs与临床表型的相关性:1)携带rs308049位点少见等位基因T(TT+TC)的患者血钙水平低于CC基因型者(P0.05),由其组成的单体型CCGGCT与PTH水平有关,携带1条以上此单体型的患者 PTH 更低(P0.05);2)携带rs7803011位点G等位基因的患者(GG+GA)颅内钙化发生率较不携带者(AA)低,校正年龄、性别、血钙、血磷后,仍是颅内钙化的保护因素(OR=0.349,P0.05)。3)在女性患者中,rs385443、rs3746069、rs308033、rs308039位点不同基因型的骨密度及其Z值存在差异(P0.05)。携带rs17828831位点少见等位基因A的男性患者股骨颈、全髋及腰椎骨密度高于其他基因型患者(P0.05)。4)携带rs4806907位点C等位基因、rs385443位点G等位基因的患者出现高钙尿症的风险显著升高(OR=4.192,P0.001;OR=2.677,P=0.011)。由 rs4806907 位点 C 等位基因组成的单体型CC、CG亦与高钙尿症发生有关(P0.05)。5、Spearman相关性分析发现,VDR基因rs739837的基因型分布与血钙水平相关(r=0.186,P=0.026),血钙水平随着少见等位基因T的个数增加而升高。此等位基因与rs2228570位点的G等位基因增加治疗后高钙尿症的发生风险(P=0.042;P=0.024)。结论1、本研究发现GNA11基因的rs110844997、rs308060位点可能与成年起病Ns-HypoPT发病相关,前者的少见等位基因可能是Ns-HypoPT的保护因素,而后者少见等位基因可能是Ns-HypoPT的危险因素。2、rs308049、rs7803011、rs385443、rs3746069、rs308033、rs308039、rs4806907 可能与Ns-HypoPT部分临床表型有关。3、VDR基因的rs739837、rs2228570位点可能与患者对维生素D制剂的治疗反应有关。背景及目的非手术性甲状旁腺功能减退症(Ns-HypoPT)DXA检测的面积骨密度(arealbone mineral density,aBMD)往往较正常人明显升高,而不同分型的假性甲状旁腺功能减退症(psuedohypoparathyroidism,PHP)患者骨代谢特征存在一定的差异,但有关其骨量及骨骼微结构的研究很少,且仅有的研究并未分别评估不同分型PHP患者的骨代谢特点,结果具有较大的异质性。高分辨率外周定量计算机断层扫描(High resolution peripheral quantitative CT,HRpQCT)是一种新型、无创的评价桡骨和胫骨远端体积骨密度、骨几何学结构、骨微结构的技术,可分别测定皮质骨和松质骨的相关参数。目前国内外只有两项应用HRpQCT评估Ns-HypoPT、PHP患者骨骼受累的研究,其中未分别观察PHP1A、1B患者。本研究旨在采用HRpQCT技术评估中国大陆人群Ns-HypoPT、PHP1A和PHP1B患者骨骼微结构特征,并比较三类疾病DXA及HRpQCT所测各项参数的异同。方法本研究共纳入2016年1月至2017年12月于北京协和医院内分泌科诊治的Ns-HypoPT患者40例,PHP1A患者11例,PHP1B患者31例,收集所有患者的临床资料及DXA检测结果,在签署知情同意书后对其进行HRpQCT检测及数据分析。结果1、Ns-HypoPT患者的β-CTX中位数为0.24ng/ml,位于正常偏低水平。与之相比,PHP1B患者的β-CTX、ALP水平较高(P=0.020;P0.001),且在成人患者中发现以上两个指标与 PTH 呈正相关(r=0.720,P=0.008;r=0.718,P=0.001)。2、Ns-HypoPT、PHP1B患者间aBMD的比较:本研究仅有3例PHP1A患者完成DXA检测,因此主要比较了 Ns-HypoPT、PHP1B患者股骨颈、全髋与L2-L4的aBMD及其Z值结果。其中Ns-HypoPT患者各部位aBMD相应的Z值较高,均值在1.3～2.5,部分患者甚至达5.0以上。在校正年龄、性别及BMI后,PHP1B组患者各部位aBMD及其对应Z值均低于 Ns-HypoPT 患者(P0.05)。3、三组患者与正常对照组间HRpQCT各项参数的比较:1)Ns-HypoPT与正常对照:患者胫骨松质骨体积骨密度(Tb.vBMD)及小梁骨数量(Tb.N)较正常对照升高(P0.05),小梁骨分离度(Tb.Sp)、小梁骨不均一性(Tb.1/N.SD)降低(P0.001)。2)Ns-HypoPT与PHP1A:除PHP1A患者的胫骨小梁骨不均一性(Tb.1/N.SD)高于Ns-HypoPT患者(P=0.027)外,两组患者桡骨及胫骨的其他参数未见显著差异(P0.05)。3)Ns-HypoPT与PHP1B:PHP1B患者桡骨小梁骨体积骨密度(Tb.vBMD)、小梁骨体积分数(Tb.BV/TV)、小梁骨厚度(Tb.Th)均显著低于Ns-HypoPT患者(P0.05),皮质骨孔隙度(Ct.Po)则显著高于Ns-HypoPT患者(P=0.030);胫骨的小梁骨分离度(Tb.Sp)、小梁骨不均一性(Tb.1/N.SD)显著高于Ns-HypoPT患者(P0.05)。4)PHP1A、PHP1B与正常对照:PHP1A及1B患者分别与正常对照组相比,各项参数均未见显著差异。而两种分型的PHP患者相比可见,PHP1B患者桡骨的Tb.vBMD、Tb.BV/TV、Tb.Th显著低于PHP1A患者(P0.05),但其他参数及胫骨的各项参数未发现有统计学意义的差异(P0.05)。4、Ns-HypoPT、PHP1B患者aBMD、HRpQCT各项参数与临床特点的相关性:1)Ns-HypoPT:Ns-HypoPT患者的病程与腰椎(L2-L4)aBMD及其相应Z值,桡骨Ct.vBMD、Tb.vBMD、Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.1/N.SD 呈正相关(β=0.002、0.017、0.161、0.175、0.240、0.100、0.002,P0.05),与桡骨 Tb.Sp、胫骨 Ct.Po 呈负相关(β=-0.001、-0.400,P0.05)。2)PHP1B:PHP1B 患者的病程与桡骨 Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.Th 呈负相关(β=-0.231、-0.001、-0.171,P0.05),与桡骨 Tb.Sp、Tb.1/N.SD 呈正相关(β=0.001,P0.05)。PTH与PHP1B患者桡骨与胫骨的Tb.N呈负相关(β=-0.182、-0.206,P0.05),与胫骨Tb.Sp 呈正相关(β=0.313,P0.05)。结论1、Ns-HypoPT患者骨转换指标位于正常偏低水平;PHP1B患者的骨转换指标较其升高,且在成人患者中与PTH水平呈正相关。2、Ns-HypoPT患者各部位aBMD的Z值明显升高,而PHP1B患者各部位aBMD及其Z值明显低于Ns-HypoPT。3、Ns-HypoPT患者胫骨松质骨体积骨密度及小梁骨数量较正常对照升高,小梁骨的松化程度降低。4、PHP1B患者桡骨、胫骨的松质骨结构参数(Tb.vBMD、Tb.BV/TV、Tb.Th)低于Ns-HypoPT、PHP1A患者,但与正常对照相比无明显差异。5、Ns-HypoPT患者病程与其股骨颈及腰椎的aBMD,桡骨的Ct.vBMD、Tb.vBMD,部分骨微结构参数如Tb.BV/TV、Tb.N呈正相关,与桡骨Tb.Sp、胫骨Ct.Po呈负相关。6、PHP1B患者PTH与股骨颈aBMD的Z值,桡骨皮质骨vBMD,胫、桡骨Tb.N呈负相关,与胫骨Tb.Sp呈正相关;而病程与桡骨总vBMD、Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.Th呈负相关,与Tb.Sp、Tb.1/N.SD呈正相关。
【图文】：

２、ＳＮＰ分型结果准确性验证逡逑随机挑选１０％样本，使用Ｓａｎｇｅｒ测序方法检测不同样本各位点的基因示两种方法的符合率达１００％邋（测序验证图见图１．４，以基因各位ＭａｓｓＡＲＲＡＹ法分型准确性达１００％，结果可信度高。逡逑

不超过３次。重复扫描后图像质量仍较差者须排除。根据ＥｎｇｅｌｋｅＫｔＷ提出的视觉分级系逡逑统，将图像质量等级分为４级：Ｇ１邋（无运动伪影，，优）、Ｇ２邋（运动伪影轻微，良）、Ｇ３逡逑（运动伪影中等，中）、Ｇ４邋（运动伪影重，差），等级为Ｇ４的图像要去除（图２．４）。逡逑１０１逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R582.2

【参考文献】

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本文编号：2627093