14-3-3σ基因在肾癌细胞中的表达及其对细胞生物学特性的影响

发布时间：2020-04-23 06:33

【摘要】：目的:肾癌是泌尿男性生殖系统的常见肿瘤,透明细胞癌是肾癌的主要病理类型。研究发现14-3-3σ基因在肾癌组织中的表达明显低于癌旁组织。目前肾癌的治疗主要依靠外科手术。有研究表明14-3-3σ在肾癌组织中的表达量低于癌旁组织,14-3-3σ基因在肾癌组织与癌旁组织的差异性表达为探索新的肾癌治疗方法指引了方向。本文主要研究14-3-3σ基因在肾癌细胞中的表达及其对细胞生物学特性的影响。研究方法:在786-O、769-P和ACHN三种肾癌细胞系中,通过RT-PCR、Western Blot实验检测14-3-3σ基因的mRNA和蛋白的内源性表达;769-P和ACHN肾癌细胞转染14-3-3σsiRNA后,再通过RT-PCR、Western Blot实验检测769-P、ACHN中14-3-3σ的mRNA和蛋白表达水平,从而可以间接地反映出14-3-3σsi RNA的敲除效率;769-P、ACHN肾癌细胞再次转染14-3-3σsiRNA后检测肾癌细胞功能,包括转移与侵袭、细胞增殖、细胞周期与凋亡功能实验。结果:RT-PCR结果显示769-P肾癌细胞中14-3-3σ基因mRNA表达量显著高于ACHN细胞系,ACHN细胞系中14-3-3σ基因mRNA表达量显著高于786-O细胞系。Western Blot实验结果显示769-P肾癌细胞中14-3-3σ蛋白表达量显著高于ACHN细胞系,ACHN细胞中14-3-3σ蛋白表达量显著高于786-O细胞系。769-P和ACHN肾癌细胞分别转染siRNA,敲除14-3-3σ基因后,RT-PCR实验显示转染过14-3-3σsi RNA的769-P和ACHN肾癌细胞中14-3-3σmRNA的表达量明显低于未转染14-3-3σsiRNA组,Western Blot检测结果显示转染过14-3-3σsiRNA的769-P、ACHN肾癌细胞中14-3-3σ蛋白表达量明显低于未转染过14-3-3σsiRNA的细胞(P0.05)。转染过14-3-3σsiRNA的769-P和ACHN细胞较对照组的769-P、ACHN细胞转移与侵袭能力显著增强。细胞周期实验结果显示处于细胞周期G1期的细胞百分比对照组显著高于实验组,说明14-3-3σ基因能使细胞周期阻滞在G1期。细胞凋亡实验显示对照组中769-P细胞的凋亡细胞百分比是实验组的3倍,对照组中ACHN细胞的凋亡细胞的凋亡百分比是实验组的2倍,说明敲除14-3-3σ基因后抑制了769-P、ACHN肾癌细胞凋亡。敲除14-3-3σ基因后769-P和ACHN细胞的增殖能力较对照组显著增强。结论:14-3-3σ基因能够在肾癌细胞中表达,14-3-3σ基因能够抑制769-P和ACHN肾癌细胞的转移、侵袭和细胞增殖,促进肾癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于细胞间期。
【图文】：

图 1 RT-PCR 检测 14-3-3σmRNA 在三种肾癌细胞中的内源性表显示：769-P 肾癌细胞系中 14-3-3σmRNA 水平显著高于 786-O 和 A中 14-3-3σmRNA 高于 786-O 细胞系。ern Blot 检测769-P、786-O、ACHN 三种肾癌细胞系中图 2 Western Blot 检测 14-3-3σ蛋白在三种肾癌细胞中的内源性表显示：在 769-P、786-O、ACHN 三种细胞系内均能表达 14-3-3σ蛋

图 1 RT-PCR 检测 14-3-3σmRNA 在三种肾癌细胞中的内源性表显示：769-P 肾癌细胞系中 14-3-3σmRNA 水平显著高于 786-O 和 中 14-3-3σmRNA 高于 786-O 细胞系。rn Blot 检测769-P、786-O、ACHN 三种肾癌细胞系中
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.11

【参考文献】

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1 Anne BENZINGER, Grzegorz M. POPOWICZ, Joma K. JOY,Sudipta MAJUMDAR,Tad A. HOLAK,Heiko HERMEKING;The crystal structure of the non-liganded 14-3-3σ protein: insights into determinants of isoform specific ligand binding and dimerization[J];Cell Research;2005年04期

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本文编号：2637456