桃果实成熟期调控基因PpNAC56、PpNAC72的表达分析及功能初探

发布时间：2020-05-07 03:40

【摘要】：桃属于蔷薇科李属植物,是我国重要的经济果树。由于桃易腐烂、不耐贮藏,年供应期较短。选育不同成熟期的品种可有效延长桃果实的年供应期。因此果实成熟期是桃的重要经济性状也是育种的重要目标之一,鉴定并研究桃果实成熟期相关基因可为今后的转基因育种工作提供优良的基因资源,同时对桃分子标记辅助育种工作的开展也具有重要意义。(1)本文以199份桃种质资源为试材验证前人针对单个杂交群体开发的11个与桃果实成熟有关的分子标记,其中NAC72-Indel标记可以较好地区分出极早熟和晚熟品种。这表明该位点可能含有调控桃果实成熟期的重要基因。(2)通过分析桃NAC72-Indel位点基因组序列,发现PpNAC72与PpNAC56串联在一起,基因间隔19,863 bp。同时,分析发现番茄和甜瓜中与果实成熟有关的位点,NOR和ETHQV6.3,也存在两个NAC基因串联在一起的现象,且两个NAC基因分别与PpNAC72和PpNAC56高度同源。这表明桃PpNAC56和PpNAC72基因串联现象在果实成熟调控中可能扮演了非常重要的角色。(3)克隆并测序桃PpNAC72、PpNAC56基因的编码区序列,序列比对分析发现PpNAC56与桃参考基因组序列之间无差异;PpNAC72存在两种转录本,与参考序列相比,其中一种转录本(PpNAC72m)含一个9 bp插入。对PpNAC72和PpNAC56基因qRT-PCR分析发现,PpNAC72基因的转录水平在果实成熟前期都出现一个转录高峰,随后转录水平平缓下降;而PpNAC56基因在三个品种整个果实成熟过程中表现出较高的转录水平。这意味PpNAC72可能直接参与果实的成熟期调控。(4)利用酵母双杂交系统,分析了PpNAC56、PpNAC72和PpNAC72m的转录激活活性以及彼此之间是否存在蛋白互作。结果表明三个NAC蛋白都具有转录激活活性,因此在进行蛋白互作试验之前,需分析NAC56/72的转录激活域。然后,检测桃NAC72和NAC56基因之间有无互作还需进一步试验验证。(5)利用番茄遗传转化体系,观察‘A57’品种CK的下胚轴和子叶分化情况发现其下胚轴的分化能力高于子叶。虽然未得到转基因株系,但为进一步研究PpNAC72和PpNAC56基因的功能奠定了基础。
【图文】：

图 2-2 部分桃材料的基因组 DNAFig.2-2 Genomic DNA extracted from peach leaves记的验证查阅，我们共选取了 11 对与成熟相关的分子标记（表 2-2）在 19

图 2-3 多对引物在部分品种中的扩增情况 The amplification of Several pairs primer in part peach germplasm with different maturity dates2-Indel 标记在 199 份不同成熟期品种中的扩增Indel 标记在极早熟（编号 1-13）、晚熟和极晚熟（编号 13-54）种质资源中扩
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S662.1

【参考文献】

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本文编号：2652376